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2020年版黄精含量制备-打粉、称量、热乙醇、趁热滤过、挥醇与否、显色反应放冷时间

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药徒
发表于 2021-3-12 10:26:06 | 显示全部楼层 |阅读模式

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本帖最后由 Trocy-zizi 于 2021-3-12 10:58 编辑

  下面为黄精含量测定2020年版(和2015年版一致)的检验操作规程           【含量测定】        
         对照品溶液的制备:取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品33mg,精密称定,置100ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(每1ml中含无水葡萄糖0.33mg)。  
         标准曲线的制备:精密量取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml,分别置10ml具塞刻度试管中,各加水至2.0ml,摇匀,在冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度,混匀,放冷后置水浴中保温10分钟,取出,立即置冰水浴中冷却10分钟,取出,以相应试剂为空白。照紫外-可见分光光度法(通则0401),在582nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。  
         测定法:取60℃干燥至恒重的本品细粉约0.25g,精密称定,置圆底烧瓶中,加80%乙醇150ml,置水浴中加热回流1小时,趁热滤过,残渣用80%热乙醇洗涤3次,每次10ml,将残渣及滤纸置烧瓶中,加水150ml,置沸水浴中加热回流1小时,趁热滤过,残渣及烧瓶用热水洗涤4次,每次10ml,合并滤液与洗液,放冷,转移至250ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,精密量取1ml,置10ml具塞干燥试管中,照标准曲线的制备项下的方法,自“加水至2.0ml”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中含无水葡萄糖的重量(mg),计算,即得。   
  其中有几大问题想咨询请教各位老师和同行:
一)打粉制备。
  样品需要60℃干燥至恒重的细粉,我们的操作是切薄片,用60℃烘箱烘几个小时,时间视薄片干燥情况而定,然后打粉过5号筛,继续打粉过筛直至过不了5号筛,然后过4号筛,继续打粉过筛至过不了4号筛,全部粉末混匀,完全不能打碎的粉弃除。原则上不应该弃去粉末的,但是打粉研磨也不能碎的粉,接触面积小而重,混在一起不就影响提取率了吗?请问大家对于粉末的制备有什么更好的建议或指导呢?
二)恒重、称量。
  因样品具有吸湿性,采用含盖称量瓶进行干燥、恒重和减重称量法,用的不锈钢药勺,伸进圆底烧瓶内,用乙醇液冲洗着加够150ml。
  同事的做法是用称量纸称量,整份放进烧瓶进行实验(涉及到后续挥干问题)。  此步同行们又是怎么操作的呢?可以探讨一下减少损耗,确保称重的准确性。
三)热乙醇。
   80%热乙醇的制备:取已配制好的80%乙醇溶液适量于合适容器中(我是100ml以内醇溶液于250ml锥形瓶),电热套或99℃水浴锅中回流加热。移除热源,待几分钟没有回流滴珠就拔掉回流管,此时醇溶液也是热的。
  请问热乙醇大家是怎么制备的呢?我这个方法应该能更好地保留配比而且比较安全吧?
四)趁热滤过。
  此规程中出现两次“趁热滤过”,一次是80%热乙醇(除杂),一次是热水(提取)。
  “趁热过滤”,理解为保温、快速、不损耗。我用抽滤法滤过醇溶液,常压法滤过水溶液(因为要放凉,怕损耗在回收瓶中),每次使用的热水都是新沸的热水。
  同事都是用常压过滤法,我也用过,比较耗时,因为滤过速率较低,滤纸内的溶液也容易降温。如果是常压操作,每次倒一部分进滤纸,都会放回水浴锅保温。
  此处思考是:实验室的趁热过滤一般会如何操作?抽滤会不会真的致使细粉损耗?用的中速大滤纸抽滤,不是与布氏漏斗同径的小滤纸,滤纸没有破损。
  (曾经做过对比试验,含量结果差不多,但现在的实验则比较低)
五)挥醇与否。
  多糖类的提取规程中,醇溶液和水溶液的两提取过程的文字描述全是逗号,没有句号,也没有说醇液是弃掉的,感觉规程不严谨。类似枸杞子,前面有乙醚液,会很明显地说明弃去乙醚液,挥干至无味。但醇溶液一字不达,意思是不需要挥干至无醇味,湿哒哒地直接加水?
  但根据操作经验和咨询多方实验室得知,大家都是默认弃去醇液,并挥干至无醇味。而挥干至无醇味的方法又有2种:
  ①滤纸和粉末置水浴锅表面挥干,圆底烧瓶水浴挥干,立干立移除,整个装置都在短时间内确保去醇;
  ②滤纸和粉末室温下放置至肉眼观察的挥干(程度因人而异),圆底烧瓶不管;
  各位老师和同行,看到规程的描述,你们又会怎么操作呢?是否会除醇呢?除醇的方式又是怎样的呢?
六)显色反应时间。
  本法使用硫酸蒽酮参与多糖的显色反应。从规程中得知,需要先冰水浴中缓慢滴加硫酸蒽酮,摇匀,然后放凉,沸水浴保温10min,再冰水浴保温10min,整个反应过程涉及到温度和时间。
  其中,冰水浴的制备方式是在提前制备的暴露性大冰块中加常温水,放置一段时间,冰微融化测温0-2℃开始实验。缓慢滴加的速度是1秒1-2滴,使用3ml的塑料滴管手动控制,单次双管操作。放凉是取出后置室温下回温至手触试管外壁不冰,与室温水触感相似,此处所需时间0.5-1h。沸水浴是水浴锅设置值100℃,温度计测量达标后使用。第二个冰水浴结束后,因为温度过低,不适宜立即实验(比色皿容易产生雾化现象),会放置40min,手触试管外壁无明显冷冻感,进行实验。有的实验室会放置1.5h甚至2h。
  此处疑问:
  ①各位老师或同行,对“冰水浴缓慢滴加硫酸蒽酮”的具体操作理解是?
  ②含硫酸的实验都不适宜久置,实验显示吸光度随着放置时间延长而增大。但是冰浴后又不适宜立刻实验,而每个实验室的控温和放冷时间不一样,结果差异会比较大,哪怕自己实验室操作稳定,但所谓的标准度在哪里其实是没法确定的,那紫外的数据可靠性是否还存在?
  黄精的提取制备已经做过很多次,但总会出现这样那样的关于细节方面的疑惑,现在把大概的疑惑都罗列出来,也把我们自己的做法展示出来,恳切希望能得到老师和同行们的热心指导。

  
  
  
  
  
  





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药徒
 楼主| 发表于 2021-3-12 16:56:57 | 显示全部楼层
走过路过,回复其中一两个问题也是可以的哈
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药徒
 楼主| 发表于 2021-3-12 17:24:57 来自手机 | 显示全部楼层
Trocy-zizi 发表于 2021-03-12 16:56
走过路过,回复其中一两个问题也是可以的哈


电脑排的版,手机看有点错乱
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药徒
 楼主| 发表于 2021-3-12 18:12:00 来自手机 | 显示全部楼层
关于(热乙醇)。
我是加热回流的方法制备,会让它煮沸。
同事是放置于流动相的含盖瓶子,扭紧盖子,水浴加热,没有煮沸。
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药徒
发表于 2021-3-15 07:58:28 | 显示全部楼层
谢谢分享,工作顺利
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药徒
 楼主| 发表于 2021-3-15 08:33:51 来自手机 | 显示全部楼层
开始吧 发表于 2021-03-15 07:58
谢谢分享,工作顺利

里面有提问的,请问可以稍微写下您对这些操作的理解或习惯吗
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药徒
发表于 2021-11-11 17:51:33 来自手机 | 显示全部楼层
唉,我领导说热乙醇要扔掉的,然后一直不合格,药典么,也没有要也没说不要,真不严谨

点评

多糖不溶于乙醇,80%乙醇是为了除去有紫外吸收的杂质(如黄酮类成分),不除去会影响后面糖的测定  详情 回复 发表于 2021-11-13 21:59
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药徒
发表于 2021-11-13 21:59:49 来自手机 | 显示全部楼层
灰德华国药 发表于 2021-11-11 17:51
唉,我领导说热乙醇要扔掉的,然后一直不合格,药典么,也没有要也没说不要,真不严谨

多糖不溶于乙醇,80%乙醇是为了除去有紫外吸收的杂质(如黄酮类成分),不除去会影响后面糖的测定
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药徒
发表于 2022-9-13 10:58:15 | 显示全部楼层
药典凡例中热水指70-80℃的水,我默认热乙醇也是这个温度,将配好的80%乙醇放到75℃的水浴锅保存,我测枸杞多糖也是这样操作的。另外我有些问题,我提取了几次两个样品之间平行性不好,我又重新打粉取样恒重,还是不太行。想问一下,紫外蒽酮显色的时候会严格控制每个样品放冷的时间么。硫酸蒽酮有没有更好地溶解方法?有什么更好地改善平行性的建议呢。
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药徒
 楼主| 发表于 2022-9-19 09:54:16 | 显示全部楼层
老wen子 发表于 2022-9-13 10:58
药典凡例中热水指70-80℃的水,我默认热乙醇也是这个温度,将配好的80%乙醇放到75℃的水浴锅保存,我测枸杞 ...

你好,我这边不算严格控制样品放冷时间,但是也有在控制,一般是置冰水中待其刚凉下来没多久就拿出来,并且两管间的操作不要太久,稍微控制每管差不多的恢复常温的时间就好。硫酸蒽酮可用超声溶解。
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药徒
发表于 2022-9-22 12:49:40 | 显示全部楼层
Trocy-zizi 发表于 2022-9-19 09:54
你好,我这边不算严格控制样品放冷时间,但是也有在控制,一般是置冰水中待其刚凉下来没多久就拿出来,并 ...

好的,非常感谢
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发表于 2023-1-9 15:27:20 | 显示全部楼层
我们做酒黄精实验的重现性也不好,很难两次测到偏差范围内的数据,这个方法真的很让人头疼,太不稳定了,希望2025版药典能够改善黄精含量的检测方法
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发表于 2023-1-9 15:51:36 | 显示全部楼层
1、片或剪碎成丝状烘干一天或一天一夜后直接打粉过6号筛,不能过的部分弃去,粉末装于自封袋,放干燥器内备用
2、回流是直接置于93度恒温水浴锅中回流,从滴第一滴开始计时,到点取出,普通过滤,洗涤液放水浴锅内加热至用的时候,手摸烫手(这一步没有温度计测量统一的温度,不知道是否对最后结果有影响),滤至没有滤液滴落为止,将滤纸擦拭锥形瓶瓶口后塞入锥形瓶内,用纯化水冲洗锥形瓶瓶口与内壁,加水至150ml,同上回流(水浴温度升至100度),回流完后直接滤至250ml容量瓶(减少中间转移损失),放冷后(有时候时间来不及会放盆里冷水冷却,不知道这样操作是否影响结果)定容。
3、蒽酮硫酸是将前面加液体步骤完成后再行配置,超声3分钟使溶解,直接用刻度移液管量取8ml蒽酮硫酸快速加入试管内,适当摇晃放于冰水浴中,待到所有试管都加完后放置在冰浴中等待两分钟,捆绑4支或3支一组,置于沸水浴中加热10分钟,沸腾开始计时,取出散放在冰水浴中,全部取出后开始计时
4、上机检测时,测一支从冰水浴中取出一支(夏天开空调、冬天不开空调室温,不会起雾)
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药徒
 楼主| 发表于 2023-1-30 11:40:40 | 显示全部楼层
18874536177 发表于 2023-1-9 15:51
1、片或剪碎成丝状烘干一天或一天一夜后直接打粉过6号筛,不能过的部分弃去,粉末装于自封袋,放干燥器内备 ...

药材不可弃去,是取样量混匀后再按标准取样,药典通则也有提醒。哪怕你们厂房检验时弃去了,药检所也是不弃去的(除非各药检所的检验方法不一致),抽检时如果结果差异巨大是有风险的,和药检所做法不一致无法准确把控样品数据。我们也是切成丝后烘,一天打几次粉,基本过筛了,不能过的要混回去取样。
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药徒
 楼主| 发表于 2023-1-30 11:42:54 | 显示全部楼层
18874536177 发表于 2023-1-9 15:51
1、片或剪碎成丝状烘干一天或一天一夜后直接打粉过6号筛,不能过的部分弃去,粉末装于自封袋,放干燥器内备 ...

其他操作基本类同,但是加硫酸蒽酮的步骤,药典明确要求“在冰水浴中缓缓滴加”,我们也试过沿壁缓慢直接流下去,效果确实还行,但和滴加的效果差异也是很大,所以不用这个方法。做到后面感觉成了玄学问题……
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药徒
发表于 2023-1-30 22:09:04 来自手机 | 显示全部楼层
谢谢分享!学习一下
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