【小疑问解答5】关于细胞转染、挑克隆、传代、扩增

仲夏秋夜云

这些名词，生物专业的人当然是很清楚的，非生物专业转作生物药的人则有些不太清楚。对于新人，我总是有我的解释办法。关于整个细胞培养的流程，说起来其实很简单。
1、转染。当然可以百度一下。百度完了依然头晕。
简单的说，就是用碱基对合成一种DNA，这种DNA会让细胞表达我们想要的某种特异性成分，S。
然后把这种特别的DNA包裹在固体里，加入培养基，和细胞一起培养。
我们都知道，细胞有吞噬功能，会将特别的DNA吞噬到体内。有一定的概率，这段DNA细胞会寄宿在细胞体内，穿过细胞核膜，进入细胞核，最后插入细胞原有的基因组之中。也就是说，让细胞基因变异了，多了一段DNA。一旦细胞有了这段DNA，就会表达S。插入位点不同，表达量也不同，有的位置插入之后，变成隐性的，可能并不表达S。所以我们要把最好的细胞找出来。

2、因为是不是已经插入了DNA，DNA插在哪个位置，都是听天由命的，所以呢，就需要挑细胞挑克隆。所谓挑克隆，就是把我们需要的那个细胞找出来，它必须是已经基因变异，插入了DNA，并且插入在有效位置的。

挑克隆的方法有很多种，简单来说，就是把一整瓶细胞悬液，加入果冻粉一类的半固体物质，混匀。也有不加半固体物质的，直接挑的。能看到一点点白色物质，就是细胞。

通过肉眼，用极小的针、移液器枪头，把一个细胞连同周围的培养基吸到一个96孔板的孔里。所谓的96孔板，也就是一块塑料板，上面有96个孔。每个孔，放入一个细胞，再加入培养基，进行培养。
能不能挑到那个我们想要的细胞，就是运气问题。
有可能挑几十块板，也就是几千个细胞，也找不到一个，也有可能，半块板，就能找到一个。

找到我们想要的那个细胞的标准，就是检查每个细胞的表达物。那些被移到96孔板里的细胞，培养几天之后，就会分泌出自己的东西。我们把每个孔里的细胞悬液取出来，离心，取上清液，进行elisa检测，留下有效成分S表达量最高的细胞。表达为0的，自然就是没有转染成功的。表达较低的，可能就是插入了DNA，但是位置不好，表达的特异性抗体不多，不值得保留。

3、经过Elisa的检测之后，可能九成的细胞都被舍弃了，就留下了一点点表达了特异性物质的细胞。这些细胞，依然在96孔板里，一个孔一种细胞，会越长越多。
细胞分裂、增长有一定的规律性，为了保持它快速的，对数生长的速率，一般48小时要换一次细胞液，其实就是给细胞换培养基，补充营养。方法也很简单，就是离心、去掉上清，加入新的培养基。这个就是传代。
4、当细胞密度大了之后，就不适合在96孔板里养着的。因为一块板上96个孔，地方太小了。可以换到48孔、24孔、12孔、6孔的板子里，同样大小的板，孔越多，每个孔的面积也越小……细胞长多了，就要换板子，这个和换房子的意思一样……最后，板子太小了，移到瓶子或者其他培养瓶里，瓶子从25ml到两升……这个就是所谓的扩增。

下辈子不搞药

以前工作中做过抗原和抗体的96孔板反应，还作过细胞在克氏瓶上和转瓶上培养，倒置显微镜下看，很好看。拉网，脱壁等不同状态

下辈子不搞药

恩，是的。脱瓶壁后再破细胞壁。

毒手药王邓智先

讲的不错。

yongge

谢谢分享            

下辈子不搞药

我们当时是用酶消化后提取的

下辈子不搞药

下辈子不搞药 发表于 2012-9-8 20:23
我们当时是用酶消化后提取的

{:soso_e120:}我过时了

魔法龙

谢谢楼主分享

nf-sz

浑浊不贴壁了 是啥原因

summerrain

lz有一点漏掉了，是为了挑出单克隆，无论是半固体还是有限稀释。不然后面会有无穷多的问题。

李思思

感谢楼主分享，简洁易懂

zuiaiduanwujie

浅显易懂，太适合我了，谢谢

Leob9r

感谢楼主分享

Ericwbm

谢谢了谢谢了谢谢了谢谢了