大肠杆菌发酵生物制品，工艺相关杂质问题

痛饮狂歌

在大肠杆菌发酵生物制品工艺研发中遇到以下问题，希望有前辈能指教：1、发酵过程中用到诱导剂IPTG，消泡剂（GPE6330，聚醚类消泡剂），ICH明确要求进行杂质评估？如何进行评估？有无推荐的检测方法？
其他培养基成分（如甘油、氯化钙、酵母粉、蛋白胨等）的残留如何评估？
2、大肠杆菌发酵，获取包涵体是用到溶菌酶、DNA水解酶，在工艺验证时，如何检测其残留量？标准任何制定？
ICH中明确要求，下游工艺要用到的酶算是杂质要评估。
3、利用分子筛进行最后一步纯化，同时置换成原液缓冲体系，是否需要对前一不纯化工艺的物质进行残留评估？

问题有些小白，可是不知道如何实际操作，望大神们指点

gxmedplant

杂质评估应该是终产物里评估吧？你把最后产品跑个HPLC不就知道了？

暗影幽殇

培养基成分一般在吸附层析步骤就去除了，这个你需要和下游纯化的人员一起做评估

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关注下。方便以后讨论

微影

我们的经验是在工艺确认或验证的时候从第一部纯化开始检测IPTG和消泡剂残留，直到在后续纯化步骤中检测不到为止，最后再最原料进行一次残留检定。其他成分甘油、氯化钙是未做检定的，蛋白胨需要提供非疫区证明，同时最好做一下病毒去除评估。工艺中用到的酶，同样每一步纯化都应当检测，证明是如何在纯化过程中被出去的，酶一般厂家会有酶残留的检测试剂盒或方法