辐照灭菌过程确认--利用微生物负载数量和/或抗力的信息建立灭菌剂量

贞贞

第一步
测定初始生物负载
为了做生物负载分析，至少要分别从三批独立的产品种抽出10个样品进行检测。计算出每一批产品的平均生物负载，用3个样品的平均生物负载作为三批样品的总平均生物负载。如果三批产品种有一批的平均生物负载比总平均生物负载大两倍或者两倍以上，就用此批的平均值来做剂量验证，否则用总平均值来做剂量验证。

第二步
获得验证剂量
根据确定的生物负载量，通过查GB 18280.2-2015/ISO 11137-2:2006标准中的表5确定达到10-2灭菌水平的剂量。

第三步
灭菌剂量验证
用参考表格确认的验证剂量辐照100个样品，所用验证剂量的相对误差不得超过±10%。辐照后的产品全部进行无菌检测。

第四步
结果分析
如果100个实验样品中的阳性数目少于2个，则接受该验证剂量。否则不接受。

第五步
建立灭菌剂量
通过查GB 18280.2-2015/ISO 11137-2:2006标准中的表5可以确定达到某一无菌水平（一般为10-6）应采用的灭菌剂量。

实例举证
举例：SIP=1.0（即选择测试整个样品）
测试产品生物物负载
1. 计算得总的平均生物负载为6.2；因第二批平均生物负载大于总平均生物负载的2倍，故平均生物负载为12.5.

批号	平均生物负载量
1	4.2
2	12.5
3	2.0

2. 取验证剂量：通过查表5，得验证剂量为5.5（遵循就高不就低得原则寻找适合剂量）。
3. 灭菌剂量验证：选取100个样品进行辐射灭菌，辐射剂量范围为：5.0~6.1kGy。辐射完成后全部进行无菌检测。
4. 结果分析：出现一个阳性样品，产品接受剂量在设定得剂量范围内且接受无菌测试得结果。因此验证通过。
5. 灭菌剂量确定：通过查表5，确定10-6无菌保证水平的灭菌剂量为18.0


总结：此方法理论基础扎实，但不适用初始污染菌小于0.1的产品，且验证周期较长需要的样品较多（130件）。在有条件的情况下建议采用此方法。

lzj3168

谢谢分享！
另外，也可用VDmax方法。

山顶洞人

lzj3168 发表于 2019-12-16 10:31
谢谢分享！
另外，也可用VDmax方法。

介绍一下？

lzj3168

VDmax方法——25kGy或15kGy作为灭菌剂量的证实　　
ISO11137-2-2012中也列出了如何对两种灭菌剂量（25kGy、15kGy）进行验证的方法。这种方法被称为VDmax方法，和方法1的操作方法相似，因为该方法也需要进行原始生物负载量测定、剂量验证和无菌试验。　　
第一步：测定初始生物负载　　
至少从三批产品中抽出10份产品做生物负载分析。生物负载分析必须按照一个经验证过可行的方法进行分析。计算出每一批产品的生物负载，用30个样品的平均生物负载作为三批样品的总平均生物负载量。如果三批产品中有一批的平均生物负载量比总平均生物负载量大　　两倍或两倍以上，就用此批的平均值来做剂量确定，否则，用三批的总平均值来做剂量确定。平均生物负载的最大允许值如下：　　
VDmax25kGy1000cfu/件　　VDmax15kGy1.5cfu/件　　
第二步：进行剂量验证试验　　
初始生物负载确定后，则可确认验证剂量。通过查ISO11137-2-2012中的表9得出所需验证剂量。并按验证剂量对一批产品中的10份样品进行辐照处理。无菌保证水平为10-2。然后对10份辐照样品进行无菌试验。　　
第三步：结果解析　　
如果10份样品中不超过一份样品显示阳性，则接受设定的验证剂量，所选的灭菌剂量被验证。如果2份样品显示阳性，必须做第二次剂量验证。　　
第四步：灭菌剂量验证　　
从另一批样品中选出10分样品用灭菌剂量（VDmaxDose）进行辐照，对辐照后样品进行无菌试验，如果没有阳性结果出现，则所选灭菌剂量（VDmaxDose）验证通过。

fastest2003

lzj3168 发表于 2019-12-16 11:18
VDmax方法——25kGy或15kGy作为灭菌剂量的证实　　
ISO11137-2-2012中也列出了如何对两种灭菌剂量（25kGy ...

此方法有局限性，如果生物负载大于1000/件，就不能使用VDmax25，大于1.5/件，就不能使用VDmax15

薄荷头

请问生物负载如果确定？比如生物负载1.0，单位是什么呢？

fimchen

路过，学习一下

眼睛里的海

灭菌剂量验证中需要做阳性对照吗？如果需要，那么加的是什么菌？为什么？

来自安卓APP客户端

Anneyu_zY5yM

谢谢楼主分享

逝去的年华

lzj3168 发表于 2019-12-16 11:18
VDmax方法——25kGy或15kGy作为灭菌剂量的证实　　
ISO11137-2-2012中也列出了如何对两种灭菌剂量（25kGy ...

请问，我们采用的平板倾注法怎么计算生物负载啊？

王车亮

确定18之后，日常辐照的剂量范围怎么规定呢？

仗义男孩

王车亮 发表于 2020-7-30 16:02
确定18之后，日常辐照的剂量范围怎么规定呢？

还需要做最大耐受剂量和剂量分布，通过常规监测点剂量确认产品实际吸收剂量范围在灭菌剂量与最大耐受剂量之间，辐照灭菌验证时间也挺长的

lzj3168

逝去的年华 发表于 2020-7-30 15:13
请问，我们采用的平板倾注法怎么计算生物负载啊？

数菌落总数啊

paul20024316

问题是，微生物含量要培养5天，等结果出来的这段时间，微生物一直都在繁殖。像我们产品含蛋白，繁殖速度更快。5天后数量肯定变了。这种情况怎么办？

c8xpe

这个vdmax 25有点儿没看明白，比如gb 18282.2-2015中表5，根据平均生物负载以及需要达到的无菌保证水平，来查所需的辐射剂量；然后又有一个表9 平均生物负载≤1000的VDmax25和SIP剂量减少因子。前者还好理解，后者这个表9糊涂了，标准引言当中，不是说了证实25kGy，表示为VDmax25，那在表9里面查的是什么意思呢？

张淑蕊

谢谢分享喔

张淑蕊

那么初始生物负载为小于0.1用哪个方法合适呀

hfqxcljm

学习了，谢谢！

dddpp1

薄荷头 发表于 2020-3-27 22:31
请问生物负载如果确定？比如生物负载1.0，单位是什么呢？

初始污染菌啊！

刘小云

初步了解了，还需要仔细了解一下工艺和标准