一网打尽流动相相关注意事项！

大上海

一网打尽流动相相关注意事项！
一网打尽流动相相关注意事项！药研 [color=rgba(0, 0, 0, 0.298)]2016-12-22

流动相是色谱分析中不可缺少的，它可以是气体、液体、也可以超临界流体等。常见的流动相主要有：乙腈-水溶液、乙腈-醋酸水溶液、甲醇-水溶液、乙腈-磷酸水溶液等。关于流动相的选择，今天小编就不赘述了，请参考往期总结帖哈！今天咱们就总结下，流动相的储存秘诀，以及试剂混合会导致的一些色谱故障，再以及流动相长霉时应该如果处理的问题！

流动相的配制要点要记得

1.配制不含水的有机溶剂类流动相所用量筒应区分开，必须是干燥的，不得有水。

2.流动相的抽滤。含水流动相和不含水流动相的抽滤装置应区分开。抽滤不含水的有机溶剂类流动相所用装置必须是干燥的，不得有水。

3.超声波震荡，除气泡。

4.使用0.04%的叠氮钠溶液以防止流动相长菌。

流动相的储存及标识

将适量抽滤好的流动相倒入流动相专用储液瓶，润洗一次后倒入废液瓶，再将剩余流动相全部倒入专用储液瓶；填写《流动相标签》，并将标签贴在储液瓶上。更换流动相时应及时更新《流动相标签》。

流动相效期

流动相类别	效期
纯甲醇	3个月
纯乙腈	1个月
5%的甲醇/乙腈水溶液	15天
缓冲盐溶液	3天
纯化水	1天
甲醇与缓冲盐混合溶液	7天
乙腈与缓冲盐混合溶液	7天

例如：纯甲醇使用日期是2015年06月11日，有效期至2015年09月10日；甲醇与缓冲盐混合溶液配制日期是2015年03月10日，有效期至2015年03月16日。

不可忽略的步骤

加盐流动相做完实验冲洗步骤：

先用50%纯水和50%有机相冲洗，然后逐渐将有机相将低到10%甚至5%，最后用100%有机相冲洗封柱，整个过程1h以上。若是冲洗一晚上，则用5%甲醇以0.1ml/min以下的低流速冲洗。

10%异丙醇在线冲洗密封垫：

10%异丙醇需定期更换，流动相不加盐时，周期可以设置1min，冲洗0.2min；流动相加盐时，周期设置1min，冲洗0.5min，最大为0.7min（长期处于最大值会导致蠕动泵磨损）。

流动相更换：

流动相瓶必须清洗干净，含水流动相需定期更换避免长菌，纯水2天换一次，进样前和实验过程中需不定时观察流动相有无沉淀。

流动相瓶清洗：

先用酸液浸泡，然后用大量的自来水冲洗，接着用蒸馏水涮3次以上，最后一次用哇哈哈水润洗。

关于流动相所用试剂

溶剂混合产生的问题：

缓冲液的使用：

使用前必须过滤;

使用后一定要进行清洗 ，以免造成腐蚀、磨损、阻塞:用纯水冲洗30-60min（1ml/min），再用甲醇冲洗30min;

易受到细菌和霉菌的影响。

注意：不能直接用有机溶剂冲洗。

流动相脱气的必要性

更换流动相时的注意事项

更换互溶流动相时注意清洗吸滤头；

更换不互溶流动相时必须用中间过渡液清洗系统，例如异丙醇；

更换缓冲液时，应用纯水过渡；

更换流动相后应使用PURGE键快速排液。排去残液或气泡。

注意缓冲液的pH值与使用的色谱柱匹配

缓冲液必须过滤膜；

使用缓冲液期间，用注射器推纯水，清洗柱塞杆，延长泵密封垫寿命；

分析完后用纯水清洗系统。

自动进样器清洗液

如选择不当重现性不好；

常用1：1的甲醇水或不含盐的流动相；

清洗液必须过滤，经常更换；

清洗液需对样品有一定的溶解度；

不可用乙腈作为自动进样器的清洗液。

【案例分析】

我流动相中用了0.05%磷酸，测过pH大约2.4。今天发现装稀磷酸的瓶子里面长了好多絮状的沉淀，应该是长菌了吧？超纯水配制，0.45um过滤的，室温大约28度左右，大约就放了一天。。。2.4的pH也应该算有点酸了吧？怎么还长菌了呢？

正常情况下，絮状物不会到柱子里去的，除非不用滤头，这种情况最好将流动相重新配制一下，用甲醇水冲洗一下柱子。其实玻璃滤头长霉也是很有可能的，注意平时发现滤头脏了，就马上取下，将水甩干后用重铬酸钾洗液浸泡约10分钟，然后记得要用纯净水冲洗，直接从进样管路连接处冲洗就行了。还有，每天过滤流动相时注意清洁溶剂瓶，并观察滤头的清洁程度。本人曾碰到长霉的滤头吸取干净的水进入一根新的色谱柱，导致柱子报废。

关于流动相的维护：

1、如果不是做梯度洗脱，必须将有机相和水相分别配置的话。尽可能用混合好的流动相，而不是用靠仪器混合。尤其是水相为磷酸盐溶液的时候，磷酸盐溶液可是细菌的“培养基”哦，在夏天基本上1个晚上过来，里面就有肉眼可见菌团了。

2、如果非得用纯的水相作为流动相（通常是做梯度的时候），那么注意务：必每天做完实验后将水相的管路用纯水冲洗干净，用有机相保存（如果水相不含盐，直接用有机溶剂替换即可）。

3、如果有可能，请用煮沸过的水制备水相。

4、即使是混合好的流动相，如果水相含盐，有机相比例不高，那么也需要定期检查，尤其是在夏天的时候。

转自：实验与分析

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第一次看见论坛这么大的官