1213 硫酸鱼精蛋白效价测定法 (修订)

恨我不成钢

硫酸鱼精蛋白效价测定法是用于测定硫酸鱼精蛋白的效价，包括凝结时间 测定法和肝素结合力滴定法。当检验结果有争议时，以凝结时间测定法试验结 果为准。

第一法 凝结时间测定法

本法系测定硫酸鱼精蛋白供试品（T）中和肝素标准品（S）所致延长新鲜兔 血、或猪、兔血浆凝结时间的程度，以测定供试品效价的方法。

肝素标准品溶液的制备

精密称取肝素标准品适量，按标示效价加 0.9% 氯化钠溶液溶解使成几种不同浓度的溶液，相邻两种浓度每 1ml 中所含肝素效价 （单位）相差应相等，且不超过 5 个单位，一般可配成每 1ml 中含 85 单位、90 单位、95 单位、100 单位、105 单位、110 单位、115 单位、120 单位、125 单位 等的溶液。

供试品溶液的制备

供试品如为粉末，精密称取适量，按干燥品计算，加 0.9%氯化钠溶液溶解使成每 1ml 中含 1mg 的溶液。供试品如为注射液，则按标示 量加 0.9%氯化钠溶液稀释至同样浓度。

血浆的制备

同肝素生物测定法中血浆制备法制备（通则 1208）。

测定法

取管径均匀（0.8cmX3.8cm）、清洁干燥的小试管 8 支，第 1 管和 第 8 管为空白对照管，加入 0.9%氯化钠溶液 0.2ml，第 2~7 管为供试品管，每管 均加入供试品溶液 0.1ml，再每管分别加入上述一种浓度的肝素标准品稀释液 0.1ml，立即混匀。刚抽出的兔血适量，分别加入上述 8 支试管内，每管 0.8ml， 立即混匀，避免产生气泡，并开始计算时间，将小试管置 37℃±0.5℃恒温水浴 中，从采动物血时起至小试管放入恒温水浴的时间不得超过 2 分钟；如用血浆， 则分别于上述各管中加入 0.7ml 的血浆，置 37℃±0.5℃恒温水浴中预热 5~10 分钟，每管分别加入 1%氯化钙溶液 0.1ml，立即混匀，避免产生气泡，并开始计 算时间。观察并记录各管凝结时间。

结果判断

两支对照管的凝结时间相差不得超过 1.35 倍。在供试品管的 凝结时间不超过两支对照管平均凝结时间 150%的各管中，以肝素浓度最高的一 管作为终点管。

同样重复 5 次，5 次试验测得终点管的肝素浓度，相差不得大于 10 个单位。 5 次结果的平均值，即为硫酸鱼精蛋白供试品（干燥品）1mg 中和肝素的效价（单 位）。

第二法 肝素结合力滴定法

本法系采用滴定的方法，观察硫酸鱼精蛋白供试品（T）溶液中滴加肝素钠 标准品（S）后的吸光度变化，以吸光度明显增加为终点，根据终点的滴加肝素 量来测定硫酸鱼精蛋白拮抗肝素活性效价的方法。

肝素标准品溶液的配制

精密称取肝素标准品适量，按标示效价加灭菌 注射用水溶解使成 80~120IU/ml 的溶液。

供试品溶液的配制

原料供试品，精密称取适量，按干燥品计算，加灭 菌注射用水溶解配制成浓度为 0.15mg/ml 的待测溶液；分别取适量 0.15mg/ml 的待测溶液，用灭菌注射用水稀释配制成 0.10mg/ml 和 0.05mg/ml 的待测溶液。 平行配制 3 份样品。待测溶液应尽快进行测定，放置时间不得超过 4h。

制剂供试品，按标示量加灭菌注射用水配制成 0.15mg/ml 的待测溶液。平 行配制 3 份样品。

测定法

精密量取适量待测溶液，滴加肝素钠标准品溶液后震荡均匀， 在 500nm 波长处测定吸光度，连续滴加肝素标准品直至吸光度值陡然升高，准 确记录滴加肝素标准品溶液的体积。每个待测溶液平行滴定 2 次，原料 3 份样 品共得到 18 个滴定结果，制剂 3 份样品得到 6 个滴定结果。每个滴定结果计算 效价如下：

测得效价（IU/mg）=（VT×CT）/（VS×CS）

VT：加入肝素标准品的体积（ml）；

CT：肝素标准品的浓度（IU/ml）

VS：加入硫酸鱼精蛋白待测液的体积（ml）；

CS：硫酸鱼精蛋白待测液浓度（mg/ml）

结果判断

原料供试品，分别计算各份样品试验测定结果和各浓度测定 结果的平均值和标准差，相对标准偏差（RSD%）均应小于 5%。计算所有测定结 果的平均值，即为硫酸鱼精蛋白供试品每 1mg（干燥品）中和肝素的效价（单位）。

制剂供试品，计算 3 份样品 6 个测定结果的平均值和标准差，相对标准偏差（RSD%）应小于 5%，平均值即为每 1mg 中和肝素的效价（单位）

syhorchid

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