【HPLC异常问题及解决】异常4：保留时间漂移

北重楼

今天继续，分享的内容是关于保留时间漂移的系统异常，概括着来说，保留时间漂移的异常主要由三方面的因素所导致：流路系统异常，流动相及样品溶液异常以及色谱柱异常。

流路系统的异常分为两种情况，这两种情况其实在前两天的分享中都已经说过了，保留时间的漂移有可能是流路系统有漏泄导致的，需要检查流路系统的各连接部件以及泵的密封是否正常，这与之前的处理方式也是类似的。除此之外，还有所谓的流动泵头发生的气阻，这在前面提到的异常3：压力异常中也提到过，注意这里的流动泵头发生的气阻会导致保留时间随机的漂移，而不像后面的一些保留时间漂移的原因，往往要么是保留时间延迟，要么是保留时间提前。为了防止泵头的气阻发生，对流动相的脱气是非常必要的。

流动相的比例的细微变化也有可能会导致保留时间的漂移，有的时候，企业往往会比较喜欢通过比例阀对各缓冲液与有机溶剂进行等比例混合，这样会比较节省流动相配置的时间以及相对来说比较节约成本。但是相对而言，采用预先混匀的方式将流动相混合在一个容器中，可以获得较为一致的保留时间。如果你需要采用比例阀进行流动相的混合，不要忘记定期对比例阀分配流动相的准确度进行再确认。发现保留时间有单方向的漂移，也不妨试着通过预先配置流动相的方法排除一下是否是比例阀的问题。

在极个别的情况下，如果样品溶液与流动相不相容，也有可能会导致保留时间的漂移，很好理解，样品在进样的时候，并没有达到溶解平衡的状态，自然会导致峰型的异常（比如峰的分裂）以及保留时间的不一致。

最后一个导致保留时间不一致的因素与色谱柱相关，主要有以下几个方面的分支原因：

• 柱温控制异常，尤其是对于一些没有配置柱温模块的HPLC，笔者遇到过一个情况，就是夏天室内温度比较高，很早的时候还是通过分体式的空调为实验室降温，这种情况下，当空调的冷风对色谱柱产生影响的时候，保留时间会发生变化。通常一个比较高的温度有助于提高色谱柱的效率，同时在进行进样前，也需要确保色谱柱已经在柱温箱中完全得到平衡。
  
  
• 色谱柱的过载也会导致柱的分离效率降低，在分离效率降低的情况下，保留时间通常会提前，通常可以采用减少进样量或者将样品溶液进一步稀释的做法对冲这种色谱柱的过载情况，不过一般情况下，这类问题应该在方法验证阶段就能够发现，一个合适的方法对于准确的结果重现至关重要。
  
  
  
  
• 当然，色谱柱使用时间过长也会导致色谱柱的寿命下降，受到影响，不过从指南的角度而言，这或许并不会是保留时间漂移的主要的原因。与之前提到的气阻时随机的变化，对于色谱柱的损坏，往往保留时间的漂移也是单向的，随着柱子的使用时间的增加，保留时间往往是有前移的趋势。
  
  

祝大家周末愉快！



感谢原文的作者：




转载于PharmaGMP

hzleiyu

谢谢分享

youngzhou

谢谢分享

kicoo2862

看到第四个了，都看不到图啊，刷新了也是，图片显示的是“此图片来自微信公众平台，未经允许不可转载”
@北重楼

静水蓝心

谢楼主分享

阿尔卑斯雪雪

谢谢分享，非常有用