蜜环菌发酵提取生产工艺规程

毒手药王

蜜环菌发酵提取生产工艺规程
      

目的
本规程是蜜环菌发酵提取的生产技术标准，使其生产技术管理科学化、规范化，保证产品质量。
范围
   蜜环菌发酵提取
内容 1  产品概述
1.1蜜环菌浓缩液是脑心舒口服液的原料。本品为白蘑科植物蜜环菌，人工液体发酵的培养液，经浓缩滤过的液体。
1.2蜜环菌培养产物：本品为担子菌纲，白蘑科蜜环菌的发酵培养产物。本品每年进行一次以上复壮培养及菌丝检查。鲜品置显微镜下观察：在菌丝周围可见到棒状结晶体。菌索外部有一层质脆的鞘，鞘内为坚硬的白色或近白色的细长菌丝束。本品不得混有其他杂质，水分不得过10%，已发霉变质的培养产物，不得供药用。  
1.3  功能与主治： 镇静安神、养肝止晕，活性祛风。用于眩晕，头痛、失眠、癫痫。
1.4   贮藏：密封，置阴凉处储存。

2  制法
2.1 蜜环菌液体深层发酵培养

2.1.1斜面菌种培养
试管菌种用PDA培养基培养将保存在冰箱中的优良菌株的试管种转入已制备好的PDA培养基中；在25-26 ℃培养15-20天，菌丝呈棕红色，边缘白色，在暗室可见荧光，有时长出稍卷曲、驼色气生菌丝、试管背面能见到长入培养基中白黄色的根状菌索、长出培养基外的菌索蹭红色或褐色。即转入种子培养基培养。
2.1.2种子培养 种子培养基配方为：麦麸（或马铃薯）煮汁5%，葡萄糖2%，磷酸二氢钾0.15%，硫酸镁0.075%，维生素 B10.001%，蚕蛹粉0.5%，自来水加至100%，PH值自然。
2.1.2.1一级种子培养：在500ml三角瓶100-150ml培养基液，灭菌后接入1支斜面菌种，用接菌铲切碎菌种，培养基温度为24-26 ℃.在卧室加高型大容量全温度恒温培养摇床上培养120-148小时，在当菌球稠密，培养液澄清时，可转入二级种子培养。
2.1.2.2二级种子培养：在5000ml三角瓶中装入1000ml种子培养基液，灭菌后接入一级种子，接菌量为10%，在卧室加高型大容量全温度恒温培养摇床培养72-96小时，转速120转/min，培养基温度为26-28 ℃，菌球稠密培养基澄清后，即可转入三级种子培养。
2.1.2.3三级种子培养 ：三级种子培养是在种子发酵罐内进行的扩大种子培养，其培养基配方为：蔗糖1%，葡萄糖2%，蚕蛹粉1%，硫酸镁0.075，磷酸二氢钾0.15%，自来水加至100%，PH自然。
在种子发酵罐中，装入罐体积60-70%的培养基液，以120℃灭菌半小时，冷却以后以5%-10%接种量接入二级种子，在26-28℃温度下搅拌通气培养，搅拌速度为150-180转/min，通气量每分钟为1:0.3-1:0.5（v/v），培养96-120小时即可长好备用。
2.1.3发酵培养  是在发酵罐中进行的通气搅拌培养，发酵培养基与三级种子罐培养基相同。其培养条件与种子罐种子培养相同，灭菌后接入三级种子，接菌量为5-10%，搅拌速度为190转/min，培养168-192小时，当发酵液变为棕褐色、菌丝较密生长旺盛，有荧光，PH值下降至4-5，残糖

量降至0.3%-0.5%静止培养后发酵液澄清透明，啤酒色，即可终止发酵。
2.1.4采收、过滤和浓缩   发酵终止后出罐，采用离心机或板框过滤，使菌体和滤液分开，滤液浓缩至相对密度1.030-1.035（20℃），即得蜜环菌浓缩液。
2.1.5 水沉  如果滤液浑浊，可采取水沉的方法处理。 2.2.3工艺流程图
            25-26℃                      24-26℃ 试管斜面培养          500ml摇瓶种子培养                      15-20天                   120-148小时  
                        25-26℃                26-28℃ 5000ml摇瓶种子培养                  种子罐培养
                      72-96小时                 72-96小时               26-28℃               
发孝罐培养               板式过滤               滤液               160-190小时   
                                                      相对密度
            浓缩                      蜜环菌浓缩液                  1.030-1.035（20℃）  


3.清场
各工序完成后彻底清场，用过的提取罐、浓缩罐等加水清洗2次，然后加水煮沸30分钟，再加水冲洗干净，设备表面擦洗干净，地面清洁无污物，做到物品摆放有序，并填写好设备清洁、清场记录。
4.请验：及时填写请验单，标明：请验岗位、品名、批号、数量、日期等。
5.生产注意：产前产后清场；产中贴挂相应标志标识，及时贴挂标签，各岗位操作结束后，认真填写设备运行记录、批生产记录。
6 主要生产设备及操作、保养、清洁。 6.1 主要生产设备一览表
工序 设备名称 规格型号 发酵岗位  发酵罐  100L   发酵岗位 发酵罐 100L  发酵岗位  发酵罐  1000L  发酵岗位  发酵罐  1000L   提取岗位
提取罐
3000L         



7. 质量控制点
工序 质量控制点 质量控制项目
频次  深层发酵培养  斜面培养  温度  2小时1次 深层发酵培养 一级种子培养  温度   2小时1次 深层发酵培养 二级种子培养   温度  2小时1次 深层发酵培养 三级种子培养   温度
2小时1次 深层发酵培养 发酵罐培养 温度、每分钟通气量
2小时1次 深层发酵培养
减压浓缩 压力、温度
2小时1次 提取 水浸提 时间 随时 提取
减压浓缩
相对密度
结束时
8. 技术安全、劳动保护及工艺卫生








8.1技术安全：  
8.1.1禁止在车间通道、走廊、仓库出入口及灭火器旁堆积物品。 8.1.2各工作岗位、走廊应有足够的照明设备。
8.1.3设备工作台的布置应便于工人安全操作，留有安全通道。 8.1.4擦玻璃窗及登高作业要注意安全。 8.2.1机械电器设备
8.2.1.1湿手掌不准摸电源开关，不可以用湿布擦电源部分。 8.2.2.2机械发生故障时，必须立即停机，由维修人员进行修理，对于正在运转的机器，不得进行维修，检修设备时必须切断电源。挂上标牌，并有人监护。
8.2.3.3擦机器时必须停机进行，不可把抹布缠在手指上，也不可以接触转动部分。
8.2.3.4设备检修结束，在开动前，必须仔细检查有无零件、杂物混入齿轮和运转部分，工具不准放在机器上，加油要用注油器，难于加油的部分，应停机加油。
8.2.3.5任何设备使用时不能超过规定负荷，清洁设备时，严防电机进水。
8.2.3.6一切电路和电器设备发生故障时，应立即通知值班电工，仪表工进行修理。
8.3防火防毒
8.3.1车间内禁止吸烟，各工作岗位及仓库须有足够的消防设施，以备急用。
8.3.2凡易燃材料，如乙醇，必须建立严格的领发和存放制度，专人管理，贮存量应有一定限度。
8.3.3散发粉尘的岗位，要设排风装置，严加密闭，设备管道和阀门要经常的检修和维护。
8.4劳动保护
8.4.1散发粉尘的岗位操作人员配带防护口罩、手套。
8.4.2接触洗涤剂、清洁剂、消毒剂人员配备橡皮手套，清洗设备人员配备雨靴。  







9. 质量标准
9.1 名称：蜜环菌提取液
9.2性状 ：本品为棕褐色液体；味微苦、微甜。 9.3鉴别
（1）取本品20ml，加正丁醇10ml，乙酸乙酯15ml，密塞，振摇5分钟，静止，取上清液2ml，挥至近干，加水约0.5ml、滴加2,4-二硝基苯肼试液2-3滴，即显红橙色浑浊或沉淀。
（2）取本品0.5ml，加甲醇10ml，温热5分钟，时加振摇，滤过，取滤液1ml，置蒸发皿中，蒸干，残渣滴加三氯化锑的氯仿饱和溶液，在蒸干，即显紫色。
（3）取本品1ml，加甲醇10ml，浸渍1小时，时加振摇，滤过，取滤液照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录）试验，取滤液5μl，点于硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸乙酯（4:2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在110℃加热10分钟，即显蓝色斑点。
9.4检查
9.4.1相对密度  应不低于1.10（中国药典2010年版一部附录）。 9.4.2微生物限度   取本品适量  依法（中国药典2010年版一部附录）检查。细菌总数不得超过100个/ml，霉菌、酵母菌数不得过100个/ml，不得检出大肠杆菌与活螨。  
10. 贮藏条件   密封，置阴凉干燥处。 10.7贮藏有效期  暂定6个月。 培训
培训部门：总工办
培训对象：车间主任、工艺技术员、相关岗位人员。 培训时间：3小时

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谢谢分享

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qianfuzhen

请问，有谁已经有按药王的资料，做的出来吗？

86834772

qianfuzhen 发表于 2018-9-20 11:37
请问，有谁已经有按药王的资料，做的出来吗？

你试了没？ 我这现在怎么都搞不定了 哈哈

一土日月

真的太佩服了！正需要这方面的资料呢

王瑶WY

PH自然 什么意思呀

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