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高效液相色谱法是20 世纪70年代迅速发展起来的一项高效快速的分离、分析技术。色谱柱是高效液相色谱的心脏, 在高效液相色谱法的应用过程中, 保持色谱柱的柱效、容量和渗透特性, 延长柱子的使用寿命非常重要。现结合日常工作，就色谱柱的使用及保养与大家进行交流。
一、色谱柱的选择
在选择色谱柱之前，先了解自己的样品和杂质，它们的类型结构、极性、酸碱性、分子量大小等等。
(1)极性的且弱酸性的样品，就可以选择C18在100%酸性水溶液条件下检测，既要选择承受100%纯水且对极性化合物保留很好的色谱柱。如果样品极性太强，或酸性太强，可以选择CN，NH2，或硅胶柱，HILIC（亲水色谱），也有使用C18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱。
(2)碱性的样品可选择高纯硅胶柱或一些经过修饰的C18柱（如极性嵌入技术或碱去活技术等），他们都会减少碱性化合物的拖尾，一般会选择中性或偏碱的条件下做，因为这样可增加碱性样品的保留。如果碱性化合物的极性太强，或碱性太强，可以选择宽pH的C18色谱柱在高pH值检测或者选用HILIC色谱柱，选择强离子交换柱，或者使用C18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱。
二、色谱柱的保养
(1)溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损，并且容易堵塞色谱柱，所以样品和流动相在使用前应先除去微粒及杂质，建议使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌；使用滤膜过滤溶剂去除微生物；每两天更换或过滤溶剂；避免溶剂瓶直接日照。
(2)流动相使用前必须进行脱气处理，以除去其中溶解的气体（如O2），防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡。气泡会增加基线的噪音，造成灵敏度下降，甚至无法分析。溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化，柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。
(3)了解样品在流动相中的溶解度，如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出。
(4)设置流动相流速时，注意观察系统压力，一般来说在满足分析的前提下使系统维持比较低的压力对仪器是非常有好处的。以粒径5μm的色谱柱为例，不同内径色谱柱适宜的流速见下表。
 (5)在使用紫外检测器时，所用波长与所用溶剂的截止波长接近或低于截止波长时容易产生噪音干扰，从而影响检测结果。所以在使用紫外检测器时，所用波长应至少比所用溶剂的截止波长大20nm以上。
三、色谱柱的维护
拿到一根新色谱柱时，最好进行柱的性能测试，同时保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录测定条件。在做性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。同时，在使用过程中，应注意以下问题。
(1)色谱柱在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度，避免较强的机械振动，以免引起柱床产生空隙。
(2)避免压力和温度的急剧变化及任何机械振动，这些情况都会影响柱内的填充状况，因此调节流速时应缓慢进行。
(3)应逐渐改变流动相中溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂变为纯水相，反之亦然。
四、色谱柱的再生
反相色谱柱选择20倍柱体积的：甲醇/水（1:1）-乙腈-异丙醇依次冲洗，完成后再相反顺序洗。
正相色谱柱选择20倍柱体积的：正己烷-异丙醇-二氯甲烷-甲醇依次冲洗，完成后再相反顺序洗。
五、色谱柱的存放
存放前除去杂质、盐等，防止细菌生长。选择合适的存放溶剂，对于反相柱可以存放于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以存放于正己烷（脱水）中，离子交换柱可以存放于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，色谱两端密封保存，避免柱床干枯，避免机械震动，注意存放的温度。
来自辽宁省药检所 | 
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