蒲公英 - 制药技术的传播者 GMP理论的实践者

搜索
查看: 2854|回复: 4
收起左侧

[吐槽及其它] 关于“冻存所用保护剂”

[复制链接]
发表于 2013-4-23 10:53:44 | 显示全部楼层 |阅读模式

欢迎您注册蒲公英

您需要 登录 才可以下载或查看,没有帐号?立即注册

x
请问,菌种、细胞冻存时,如何选择“甘油和二甲基亚砜”

两者有何区别?在选择冻存菌种、细胞时,出于什么考虑来选择?
回复

使用道具 举报

药徒
发表于 2013-4-23 13:03:56 | 显示全部楼层
保护剂目的都是避免因为水分凝结成冰晶而损伤菌种或细胞,
听说:真核细胞冻存常用DMSO,原核细胞就常用甘油。
期待高手详细解答{:soso_e113:}
回复

使用道具 举报

药徒
发表于 2013-4-23 23:42:19 | 显示全部楼层
回复

使用道具 举报

药徒
发表于 2013-4-24 09:07:57 | 显示全部楼层
本帖最后由 半拉木匠 于 2013-4-24 09:09 编辑

具体机理不知道  描述一下表征吧
菌种一般都是甘油保存在-20以下的 最终的状态是液体的 所以肯定不会出现冰晶 并且好像还可以提供一些营养(营养这点完全是听说),至于那些保存在液氮中的是什么个情况 我就不知道了。
细胞:含一定量DMSO 的培养液,保存在液氮(-176吧?),最终状态是固体冰疙瘩,冻冰的过程是非常缓慢的梯度降温过程,最主要的伤害是在结冰初期 加入DMSO的作用是尽量少的产生冰晶 也就防止冰洁刺伤细胞了。
也就知道这么多了 希望能帮到你
回复

使用道具 举报

药生
发表于 2013-4-24 10:40:42 | 显示全部楼层
首先来搞清楚为什么要加冻存保护剂……
想象一下冻西瓜,西瓜打开,红色的瓤,很多很多小颗粒的泡泡,里面都是水分,一旦冻起来,水分结成冰,刺破了泡泡的膜,也就是细胞膜,再解冻,西瓜就是一滩水,不可能保持原来西瓜的样子,因为细胞膜都破了。
冻存保护剂的作用就是置换出细胞里的多数水分,油份的东西和水分置换置换,冻起来,油状的东西还润泽柔软的,不会形成冰晶,像剑一样刺破细胞膜。冻的时候要缓冻,就是逐步降温,慢慢冻,一般就是置放在异丙醇当中,将异丙醇作为传温媒介,一点点冻,一般四到八个小时之后从室温降到-80℃。而一般用甘油保护的菌体似乎不用梯度降温,一般直接就扔到-20℃了,这个和温差不大、甘油低温保持油状的特性有关。
首先,甘油和DMSO的区别就在于这两者在多低温度下还能保持自己的状态,不变性、不伤害细胞内的细胞脏器。
就好像地板说的,这就是为什么一般甘油用于大肠杆菌等菌体的保存,因为一般保存温度就是-20℃,而DMSO比较稳定,但有明显毒性,好处在于DMSO在液氮气象也就是-176℃中保持润泽,保持细胞休眠状态。
所以保持在超低温下的细胞在37℃下快速溶解之后,需要立刻加入新鲜培养基将冻存液置换出来,养两天再次换培养基,直到所有有毒性的培养基置换出来之后才进入正常培养状态。
总的来说还是因为甘油和DMSO 的本身特性决定的。其实在细胞培养初期,确实有人用甘油做液氮保存的保护剂,但是效果不高,复苏之后,细胞活率低,粘稠状不宜置换等等。加入10%DMSO的培养基配成的冻存液则非常容易用培养基置换。各种因素吧,后来大家习惯超低温保存的,用10%DMSO,复苏之后换培养基。低温保存的细菌类用甘油,复苏之后有的置换,有的直接加培养基培养了……
回复

使用道具 举报

您需要登录后才可以回帖 登录 | 立即注册

本版积分规则

×发帖声明
1、本站为技术交流论坛,发帖的内容具有互动属性。您在本站发布的内容:
①在无人回复的情况下,可以通过自助删帖功能随时删除(自助删帖功能关闭期间,可以联系管理员微信:8542508 处理。)
②在有人回复和讨论的情况下,主题帖和回复内容已构成一个不可分割的整体,您将不能直接删除该帖。
2、禁止发布任何涉政、涉黄赌毒及其他违反国家相关法律、法规、及本站版规的内容,详情请参阅《蒲公英论坛总版规》。
3、您在本站发表、转载的任何作品仅代表您个人观点,不代表本站观点。不要盗用有版权要求的作品,转贴请注明来源,否则文责自负。
4、请认真阅读上述条款,您发帖即代表接受上述条款。

QQ|手机版|蒲公英|ouryao|蒲公英 ( 京ICP备14042168号-1 )  增值电信业务经营许可证编号:京B2-20243455  互联网药品信息服务资格证书编号:(京)-非经营性-2024-0033

GMT+8, 2024-11-24 21:05

Powered by Discuz! X3.4运维单位:苏州豚鼠科技有限公司

Copyright © 2001-2020, Tencent Cloud.

声明:蒲公英网站所涉及的原创文章、文字内容、视频图片及首发资料,版权归作者及蒲公英网站所有,转载要在显著位置标明来源“蒲公英”;禁止任何形式的商业用途。违反上述声明的,本站及作者将追究法律责任。
快速回复 返回顶部 返回列表