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[其他] Cell Research论文:瑞德西韦、磷酸氯喹能在体外有效抑制新型冠状病毒

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大师
发表于 2020-2-8 18:22:40 | 显示全部楼层 |阅读模式

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翻译:Pharmlink 华平

摘要:2020年2月4日,Cell Research刊发文章,题为“Remdesivir and chloroquine effectively inhibit the recently emerged novel coronavirus (2019-nCoV) in vitro”(瑞德西韦和磷酸氯喹能在体外有效抑制新型冠状病毒),该文章收到时间为2020年1月25日,接受时间为2020年1月28日。

这是中国科学院武汉病毒研究所/生物安全大科学研究中心与军事科学院军事医学研究院国家应急防控药物工程技术研究中心开展的联合研究,表明在抑制2019新型冠状病毒(2019-nCoV)药物筛选方面取得了重要进展。

研究中使用了7种常见的抗病毒相关药物,其中有5种是经过FAD批准的药物——利巴韦林(ribavirin)、潘昔洛韦(penciclovir)、硝唑尼特( nitazoxanide,)、萘莫司他(nafamostat)、氯喹(chloroquine),另外还有两种注明的广谱抗病毒药物瑞德西韦(remdesivir,GS-5734) 和法匹拉韦( favipiravir),来测试出他们对临床分离的新型冠状病毒的细胞毒性。

研究发现在Vero E6细胞上,瑞德西韦(Remdesivir, GS-5734)和氯喹(Chloroquine)在细胞水平上能有效抑制新型冠状病毒的感染,其在人体上的作用还有待临床药物。其他的5种药物对抗新型冠状病毒的感染都不太理想。

以下是论文原文:
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2019年12月,拥有一千一百万人口的中国中部城市武汉,出现了一种由先前未知的病原体引起的新型肺炎。最初的病例与武汉市海鲜市场的暴露有关。截至2020年1月27日,中国当局报告在中国大陆确诊2835例病例,包括81例死亡。此外,在香港,澳门和台湾发现了19例确诊病例,在泰国,日本,韩国,美国,越南,新加坡,尼泊尔,法国,澳大利亚和加拿大发现了39例输入病例。

新型冠状病毒(2019-nCoV)与严重急性呼吸系统综合症冠状病毒(SARS-CoV)密切相关。目前,尚无针对新病毒的特殊治疗方法。因此,迫切需要找到有效的抗病毒药物来对抗这种疾病。

一种药物发现的有效方法是,测试现有的抗病毒药物是否有效治疗相关的病毒感染。2019-nCoV属于Betacoronavirus,改家族也包含SARS-CoV和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)。SARS或MERS患者使用了几种药物,例如利巴韦林(ribavirin),干扰素(interferon),洛匹那韦-利托那韦(lopinavir-ritonavir),皮质类固醇(corticosteroids),尽管某些药物的疗效仍存在争议。在这项研究中,研究人员评估了五种经过FAD批准的药物对临床分离的2019-nCoV的抗病毒效力,其中包括利巴韦林(ribavirin),喷昔洛韦(penciclovir),硝唑尼特(nitazoxanide),那法莫司(nafamostat),磷酸氯喹(chloroquine)和两种著名的广谱抗病毒药物瑞德西韦(remdesivir,GS-5734)和法维吡韦(favipiravir,T-705)。

进行标准测定,以测量这些化合物对2019-nCoV的细胞毒性,病毒产量和感染率的影响。首先,通过CCK8分析确定候选化合物在Vero E6细胞(ATCC-1586)中的细胞毒性。然后,在不同浓度的受试药物存在下,用nCoV-2019BetaCoV/Wuhan/WIV04/2019感染Vero E6细胞,感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.05。在对照中使用DMSO。通过定量实时RT-PCR(qRT-PCR)定量细胞上清液中的病毒拷贝数来评估功效,并在感染后48小时,通过免疫荧光显微镜可视化病毒核蛋白(NP)的表达进行确认(细胞病变在感染的时间点效果不明显)。在这7种受测药物中,以下三种核苷类似物在高浓度下才能减少病毒感染:
  • 利巴韦林(半最大有效浓度(半数有效浓度EC50= 109.50μM,半细胞毒性浓度CC 50> 400μM,选择性指数(SI)> 3.65),
  • 喷昔洛韦(半数有效浓度EC50  = 95.96μM,半细胞毒性浓度CC 50 > 400μM,选择指数SI> 4.17)和
  • 法维吡韦(半数有效浓度EC50  = 61.88μM,半细胞毒性浓度CC 50  > 400μM,选择指数SI> 6.46)。


尽管法维吡韦在Vero E6细胞中的半数有效浓度EC50值很高,但已显示出在保护小鼠抗埃博拉病毒攻击方面具有100%的有效性,提示可以进行进一步的体内研究,以评估这种抗病毒核苷。

那法莫司是一种有效的MERS-CoV抑制剂,可防止膜融合,可抑制2019-nCoV感染(半数有效浓度EC50  = 22.50μM ,半细胞毒性浓度CC 50 > 100μM,选择指数SI> 4.44)。

硝唑尼特是一种具有商业潜力的抗原虫药物,具有针对多种病毒的抗病毒潜力,包括人和动物冠状病毒,可在低微摩尔浓度下抑制2019-nCoV(半数有效浓度EC50  = 2.12μM ; CC 50  > 35.53μM; 选择指数SI> 16.76) 。建议对该药物针对2019-nCoV感染进行进一步的体内评估。

值得注意的是,两种化合物瑞德西韦(半数有效浓度EC50  = 0.77μM ; 半细胞毒性浓度CC 50  > 100μM; 选择指数SI> 129.87)和磷酸氯喹(半数有效浓度EC50  = 1.13μM ; 半细胞毒性浓度CC 50  > 100μM,选择指数SI> 88.50),在低微摩尔浓度下有效地阻断了病毒感染,并显示出较高的选择指数SI。(图1a,b)
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瑞德西韦最近被公认为是有前途的抗病毒药物,针对培养细胞,小鼠和非人类灵长类动物(NHP)模型中的多种RNA病毒(包括SARS / MERS-CoV 5)感染的。目前正在临床治疗埃博拉病毒感染。瑞德西韦是一种腺苷类似物,可整合到新生的病毒RNA链中并导致过早终止。研究人员的加药时间分析表明,瑞德西韦在病毒侵入后的一个阶段起作用,这与其作为核苷酸类似物的推定抗病毒机制相符。沃伦等的研究结果表明,在NHP模型中,静脉内施用10 mg / kg剂量的瑞德西韦,可导致其活性形式在血液中以持续水平存在(10μM),并提供100%的埃博拉病毒感染防护。研究人员的数据显示,在Vero E6细胞中,瑞德西韦对于2019-nCoV的EC 90值为1.76μM,这表明它可能在NHP中达到其工作浓度。研究人员的初步数据显示,瑞德西韦还可以有效抑制人细胞系(人肝癌Huh-7细胞)中的病毒感染,该细胞系对2019-nCoV敏感。


磷酸氯喹是一种广泛使用的抗疟疾和自身免疫性疾病药物,最近被报道为潜在的广谱抗病毒药物。磷酸氯喹通过对病毒/细胞融合所需的增加体pH,以及与SARS-CoV病毒的细胞受体的糖基化的干扰已知块病毒感染。添加时间分析表明,磷酸氯喹在Vero E6细胞中2019-nCoV感染的侵入和侵入后阶段均起作用。除其抗病毒活性外,磷酸氯喹还具有免疫调节活性,可在体内协同增强其抗病毒作用。口服后,磷酸氯喹广泛分布于整个身体,包括肺。在Vero E6细胞中,磷酸氯喹对2019-nCoV 的EC 90值为6.90μM,在接受500 mg给药的类风湿关节炎患者的血浆中,临床上可达到该浓度。磷酸氯喹是一种便宜且安全的药物,已经使用了70多年,因此,它可能在临床上适用于2019-nCoV。

研究人员的发现表明,瑞德西韦和磷酸氯喹在体外控制2019-nCoV感染方面非常有效。由于这些化合物已具有用于人类患者的安全记录,并且显示出对疾病的功效,因此研究人员建议应在患有新型冠状病毒疾病的人类患者中对它们进行评估。
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Link:
Remdesivir and chloroquine effectively inhibit the recently emerged novel coronavirus (2019-nCoV) in vitro
https://www.nature.com/articles/s41422-020-0282-0

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药生
发表于 2020-2-8 20:42:06 来自手机 | 显示全部楼层
希望疫情赶快过去,回归正常生活。
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药生
发表于 2020-2-9 07:03:10 | 显示全部楼层
很多药物需要长时间的评估,才能保证疗效和安全。用药安全是第一,要不然还不如不用。在疾病面前,最好的方式就是提前预防,提高自身的免疫力,才行最实际有效的方式。
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发表于 2020-4-13 09:41:09 | 显示全部楼层
瑞德西韦是一种在研药物,尚未在世界上任何国家获得批准,需要更广泛的努力以确定它是否是一种安全、有效的治疗方案。
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药王
发表于 2022-8-5 19:58:18 | 显示全部楼层
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