关于宿主菌蛋白残留问题

zshlmh · 发表于 2013-2-28 12:08:35

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本人现在做蛋白质纯化，先将包含体变性，复性30小时后先用阴离子交换层析之后用阳离子交换层析提取目的蛋白最终宿主菌蛋白残留检测超标跪求各位老师解决办法。目的蛋白等电点6.4 谢谢

仲夏秋夜云 · 发表于 2013-2-28 13:30:07

用了阴离子和阳离子两种方法啊……宿主蛋白超标的话，无非就是柱效不好，填料问题等等。我不知道你做什么项目……不过亲和、阴离子、阳离子这些方法适用于不同的产品，建议过两次阳离子试试。目前我遇到的基本都是阳离子效果比阴离子好，我甚至有时候不过阴离子，过两遍阳离子……

zshlmh · 发表于 2013-3-1 12:10:27

老师您好，我是做重组蛋白的纯化，阳离子用CM胶，包含体经变性复性后有好多杂质，杂蛋白。如果直接进行阳离子层析介质会出现严重分层导致目的蛋白直接穿出。还有就是内毒素不能去除。

dasheng1980 · 发表于 2013-3-1 17:20:46

这个东西从洗涤过程就要好好控制，分子塞可以试一下，不知道你们的用过没。

dasheng1980 · 发表于 2013-3-1 17:22:06

根据你的分子量选一下，试试看！

dasheng1980 · 发表于 2013-3-1 17:24:48

内毒素可以通过阴离子层析去除，但要看你的是强阴还是弱阴。

zshlmh · 发表于 2013-3-2 10:11:38

谢谢老师们的建议我试试看

wolaichaziliao · 发表于 2013-3-2 10:27:00

根据目的蛋白和宿主菌蛋白的特性去除，考虑分子大小、等电点等，这个需要不断摸索的，祝你成功

min930 · 发表于 2013-3-2 21:27:47

疏水性、分子量大小都可以考虑

zshlmh · 发表于 2013-3-3 00:13:59

min930 发表于 2013-3-2 21:27
疏水性、分子量大小都可以考虑

疏水性??????不大懂请问怎么研究？

min930 · 发表于 2013-3-3 16:34:32

zshlmh 发表于 2013-3-3 00:13
疏水性??????不大懂请问怎么研究？

结构分析，也可以实验，这个是比较有用的

zshlmh · 发表于 2013-3-3 19:05:32

min930 发表于 2013-3-3 16:34
结构分析，也可以实验，这个是比较有用的

好的谢谢老师

梦里的水乡 · 发表于 2013-3-3 19:06:30

夏妹妹好厉害，长见识了

梦里的水乡 · 发表于 2013-3-3 19:07:08

你们不是用蛋白质纯化机吗？

zshlmh · 发表于 2013-3-3 20:40:28

梦里的水乡发表于 2013-3-3 19:07
你们不是用蛋白质纯化机吗？

我们用的离子交换层析柱

仲夏秋夜云 · 发表于 2013-3-4 08:47:32

其实改变一下载量也可以……

zshlmh · 发表于 2013-3-4 11:57:25

仲夏秋夜云发表于 2013-3-4 08:47
其实改变一下载量也可以……

增加胶的体积或者减少上样量？

仲夏秋夜云 · 发表于 2013-3-4 12:05:45

zshlmh 发表于 2013-3-4 11:57
增加胶的体积或者减少上样量？

是啊，有时候载量过高对效果的影响很大，尤其是小试合格，但等比放到中试就不合格的情况

zhuzhuwinner · 发表于 2013-3-28 17:04:49

楼主不是在做胰岛素吧？