回收率验证加标浓度设置

后春天的诗unv

我的杂质回收率验证需在样品加标后再与TFA乙腈溶液混合以去除基质效应，如50μl样+50μl标准品混匀，再加100μlTFA乙腈，现有个疑问是若加标浓度为400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL，最终混样浓度是100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL，那验证时标准曲线最高浓度应为＞100μg/mL就行，还是需＞400μg/mL？若＞400μg/mL，则被加入标准品终浓度100μg/mL不是标准曲线高、中、低里的高浓度样？

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按照最终分析浓度计算，因为样品溶液也是在该水平下进行分析的。中间的都是过程溶液，不用考虑。

鬼使神差

在杂质回收率验证中，标准曲线的最高浓度应大于等于加标后最终混样的最高浓度，即应大于等于 100μg/mL。
以下是具体解释：
标准曲线的作用是建立物质浓度与检测信号之间的定量关系，用于准确测定样品中目标物质的含量。在进行回收率验证时，需要确保标准曲线能够涵盖加标后样品中目标物质的浓度范围，这样才能准确计算回收率。
虽然加标时的浓度分别为 400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL，但经过与样品和 TFA 乙腈溶液混合后，最终混样浓度变为 100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL。因此，只要标准曲线的最高浓度能够覆盖最终混样的最高浓度 100μg/mL，就可以满足验证要求。
对于被加入标准品终浓度 100μg/mL 的样品，它在标准曲线中可以作为高浓度样来进行回收率的计算和评估。而加标时的 400μg/mL 等浓度是用于计算加标量的，与标准曲线的浓度范围设定并无直接关联。标准曲线是基于最终混合后的实际样品浓度来构建的，重点是要能准确测定加标后样品中目标物质的含量，从而验证回收率是否符合要求。

后春天的诗unv

鬼使神差 发表于 2025-4-7 11:07
在杂质回收率验证中，标准曲线的最高浓度应大于等于加标后最终混样的最高浓度，即应大于等于 100μg/mL。
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懂了，谢谢解惑