关于微生物计数有一点疑惑

微信hfbzxilk

各位老师们，关于微生物计数菌数报告规则中，
我们的产品取10g料液进行10倍稀释为100ml供试液，取1ml进行平皿法实验，最终结果通过每皿生长菌落数×稀释倍数得出最终值（例：平均值为2cfu/皿×10=20cfu/g）
但是最近产品要求从原先的需氧菌≤100cfu/g，霉菌≤10cfu/g,提高标准到了需氧菌≤50cfu/g，霉菌≤5cfu/g，
那目前我们的检验方法就得重新设定，我这边的设定是稀释倍数不变，取2ml进行平皿法接种测试，含供试品0.2g,那么计算过程也就从

需氧菌平均菌落数=∑每个平皿菌落数/平皿总数

霉菌和酵母菌平均菌落数=∑每个平皿菌落数/平皿总数

菌落总数=需氧菌平均菌落数*稀释度+霉菌和酵母菌平均菌落数*稀释度

初始污染菌数=菌落总数×校正因子                                   

修改为

需氧菌平均菌落数=∑每个平皿菌落数/平皿总数

霉菌和酵母菌平均菌落数=∑每个平皿菌落数/平皿总数

需氧菌总数=需氧菌平均菌落数×修正系数÷[1]供试品接种量

霉菌和酵母菌总数=霉菌和酵母菌平均菌落数×修正系数÷供试品接种量

若滤膜上无菌落生长，以< 1报告菌数。

这样设置之后 若平皿生长菌数平均值为5cfu,那么报告结果为25cfu/g

或者平皿未长菌，那么报告结果未＜1/0.2=＜5cfu/g

但是同事一直很质疑这样设置来着，说药典上面不是这么写的啥啥啥的

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[1] 接种含供试品量的单位为一般为标准要求的供试品数量单位，例：当取样100cm2包装材料后拭子置于100ml氯化钠-蛋白胨缓冲溶液中进行溶解作为供试液，取样10ml进行薄膜过滤法后接种测试，此时接种含供试品量即为0.1（100cm2）。

以上修改为是否合理,因为越看药典的1105越迷糊

可爱的飞龙

参照小学数学的计算公式，平均值为XXcfu/皿×5

微信hfbzxilk

可爱的飞龙 发表于 2025-3-12 17:03
参照小学数学的计算公式，平均值为XXcfu/皿×5

这样可以吗，因为我这个文件是通用文件，有各类的产品通用一份文件

八档丶电风扇

2ml供试液用平皿法会有一个问题，就是培养基的量是15-20ml，有规定样品接种量不能超过培养基体积的10%，也就是说如果你要用2ml供试液，培养基加入量也要改，
其实也可以1:10,1ml供试液做多个平皿累计计数，

可亲可爱

方法怎么能说改就改的，需要重新进行验证才可以的

微信hfbzxilk

八档丶电风扇 发表于 2025-3-12 17:12
2ml供试液用平皿法会有一个问题，就是培养基的量是15-20ml，有规定样品接种量不能超过培养基体积的10%，也 ...

这样子也可以欸 既没有改变原来的方法，用量
但是我没有想出好的表达形式来形成SOP文件
   用移液枪（或灭菌移液管）吸取供试液2ml，置于直径90mm的无菌平皿中，注入15~20ml温度不超过45℃的融化的胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每个供试品每种培养基至少制备2个平板。        

修改为
  用移液枪（或灭菌移液管）吸取供试液2ml，各取1ml置于两个直径90mm的无菌平皿中，注入15~20ml温度不超过45℃的融化的胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基作为一组平行样，混匀，凝固，倒置培养。每个供试品每种培养基至少制备两组平行样。

需氧菌平均菌落数=∑取样量生长菌落数/平行组数

霉菌和酵母菌平均菌落数=∑取样量生长菌落数/平行组数

需氧菌总数=需氧菌平均菌落数×修正系数÷供试品接种量

霉菌和酵母菌总数=霉菌和酵母菌平均菌落数×修正系数÷供试品接种量

若无菌落生长，以< 1÷供试品接种量报告菌数。

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[1] 接种含供试品量的单位为一般为标准要求的供试品数量单位，例：当取样100cm2包装材料后拭子置于100ml氯化钠-蛋白胨缓冲溶液中进行溶解作为供试液，取样10ml进行薄膜过滤法后接种测试，此时接种含供试品量即为0.1（100cm2）。

ilovehusky

复议，得做方法适应性试验

八档丶电风扇

微信hfbzxilk 发表于 2025-3-12 17:20
这样子也可以欸 既没有改变原来的方法，用量
但是我没有想出好的表达形式来形成SOP文件

很简单、在制备平皿那里加一句同法制备XXX个平皿就好了

微信hfbzxilk

八档丶电风扇 发表于 2025-3-12 17:27
很简单、在制备平皿那里加一句同法制备XXX个平皿就好了

我倒是能理解，执行的人估计得来问到底咋计算

微信hfbzxilk

ilovehusky 发表于 2025-3-12 17:21
复议，得做方法适应性试验

是因为接种量变化了需要做方法学适应性  还是计算方法变化需要做适用性实验呀？
如果说仅增加接种平皿数和变化计算方式，不变化接种量以及其他稀释倍数的原条件的话，还需要做方法学嘛？
因为做一次成本也挺高的，我这边是想要尽量避免重复再对所有产品进行一次方法学的验证

八档丶电风扇

微信hfbzxilk 发表于 2025-3-12 17:35
是因为接种量变化了需要做方法学适应性  还是计算方法变化需要做适用性实验呀？
如果说仅增加接种平皿数 ...

不需要。直接升版文件就可以了

微信hfbzxilk

八档丶电风扇 发表于 2025-3-12 17:39
不需要。直接升版文件就可以了

收到，当时为了这个＜5cfu/g想的是稀释5倍再取1ml进行平皿法，还是想尽量避免做一遍全系列的适用性实验。所以才想出这么一招来。

您看一下我上面编辑的那份内容 您是否理得清 我自己看着有点晕哈哈哈

八档丶电风扇

微信hfbzxilk 发表于 2025-3-12 17:42
收到，当时为了这个＜5cfu/g想的是稀释5倍再取1ml进行平皿法，还是想尽量避免做一遍全系列的 ...

没啥问题、一般只有样品来源、工艺变化、供试液制备过程等发生改变才会重新进行方法验证

微信hfbzxilk

八档丶电风扇 发表于 2025-3-12 17:45
没啥问题、一般只有样品来源、工艺变化、供试液制备过程等发生改变才会重新进行方法验证

谢谢 辛苦您

门门

槽点太多了，我提一个问题吧：
你们这标准和方法，霉菌是只要出来1个就压线，出来2个菌落，就不合格了是吧？

ch192925

八档丶电风扇 发表于 2025-3-12 17:12
2ml供试液用平皿法会有一个问题，就是培养基的量是15-20ml，有规定样品接种量不能超过培养基体积的10%，也 ...

这就是专业，方法可行，避免了重新验证

为了微生物

我都不知道怎么说

greatwolf

微生物计数，最终报告数按科学计数法出具，，，不建议按你稀释的倍数出具，比如你稀释5倍，最后写***×5这样子。。。另外，还得考虑，固体培养基，每个皿加入的供试液的量是有限制的，别到时候培养基都不好凝固。

cwsun@163.com

微信hfbzxilk

门门 发表于 2025-3-12 18:26
槽点太多了，我提一个问题吧：
你们这标准和方法，霉菌是只要出来1个就压线，出来2个菌落，就不合格了是吧 ...

无菌产品的微生物负载线确实有点低