微限方法学试验组菌数大于菌液组数量的2倍 怎么办

微信fc6racc3

如题 各位前辈，我最近做了一个固体制剂的微限方法学，1：100平皿法，结果铜绿的试验组的菌数平均值超过了菌液组的2倍，从来没有遇到过这样的情况，这是为什么？要如何解决呢？

八档丶电风扇

1、是不是样品本身菌落数较高、所以导致实验组菌落数超2倍，正确计算：（试验组菌落数-供试品对照组菌落数）/阳性对照组菌落数；重新计算一下看看是不是真的超标了
2、菌悬液使用时没有充分混匀、导致加入的菌液不均匀；每一次加菌前都需要将菌悬液充分混匀

鬼使神差

在固体制剂微限方法学1:100平皿法中，铜绿试验组菌数平均值超菌液组2倍，可能有以下原因及解决方法：

原因

菌液不均匀：配制菌液时未充分摇匀，导致菌液浓度不均，试验组取到的菌液浓度偏高。
培养基问题：培养基成分、pH值等不合适，对铜绿假单胞菌有促进生长作用，或者培养基受其他营养物质污染，为细菌生长提供额外养分。
操作误差：试验组在涂布或倾注等操作时，可能有更多菌液被接种到平皿上；也可能是菌液组操作时，有部分菌液未接种到平皿，或接种后涂布不充分，使菌生长不充分。
环境因素：试验环境中存在大量铜绿假单胞菌污染，如空气、操作台面等，导致试验组额外污染。
样品干扰：固体制剂样品本身可能含有某些成分，在试验条件下分解或与培养基成分相互作用，对铜绿假单胞菌生长有促进作用。

解决方法

确保菌液均匀：重新配制菌液，使用前充分涡旋振荡或使用磁力搅拌器搅拌均匀，确保菌液浓度均一。
检查培养基：严格按照标准配制培养基，检查原材料质量，校准pH计，确保pH值准确。对新批次培养基进行预试验，观察是否支持正常生长。
规范操作：加强操作人员培训，严格按照标准操作规程进行接种、涂布、倾注等操作，确保操作的一致性和准确性。
优化环境：使用前用消毒剂擦拭操作台面，开启超净工作台或生物安全柜的紫外灯进行消毒，确保操作环境洁净。
评估样品：对样品成分进行分析，必要时调整试验方法，如采用薄膜过滤法等其他方法，排除样品干扰。若样品中可能含有抑菌成分，可加入中和剂。

微信fc6racc3

鬼使神差 发表于 2025-1-20 10:48
在固体制剂微限方法学1:100平皿法中，铜绿试验组菌数平均值超菌液组2倍，可能有以下原因及解决方法：

...

谢谢 我这次又做了一次 很注意细节的做了铜绿的试验组和菌液组 结果比值是1.3 感觉还是样品里有促进铜绿生长的成分 如果遇到这种情况要怎么办呢 试过薄膜过滤法，样品混悬后颗粒很小很分散 冲洗过后的试验组铜绿生长连片蔓延 看不出单独的菌落 后来就放弃了过滤的方法

门门

微信fc6racc3 发表于 2025-1-23 12:53
谢谢 我这次又做了一次 很注意细节的做了铜绿的试验组和菌液组 结果比值是1.3 感觉还是样品里有促进铜绿 ...

通常的各种方案都是为了消除供试品的抑菌活性的。但你这是有促菌作用，那还就只能稀释法了，只有稀释法是让供试品浓度变低，所以既消除抑也能消除促。
1:100还不行，就1:500。
若直接1:500正常检就会有检出值的问题，标准是不得过1000cfu/g吧，那长2个菌以上就面临超标了。 可以这么干  取10个皿，每个接种1ml，5个一组 加一起算和 算作 常规时候的1个， 这样若是未检出 结果报数和1:100的一样，是<100cfu/g。
注意，实验组和菌液组只用两个皿就行，数据计算方式跟常规一样。