微生物污染问题排查

初雪霁晴

求助：当微生物限度检验，所有培养皿（包括阴性对照）都长很多霉菌时，如何排查问题所在？已经验证操作环境中沉降、表面无霉菌。

小树冲冲

当阴性对照都长很多霉菌的时候，在排除放置环境无异常的时候，就要带着棒球棒找厂家了。

卷卷12

首先确认所谓的所有培养皿（包括阴性对照）都长很多霉菌，这些霉菌是不是都是同一类的，然后看下有没有用的东西（从人机料法环进行排查）

鬼使神差

当出现所有培养皿包括阴性对照都长很多霉菌的情况，可从以下几方面排查：

首先考虑培养基和器具。检查培养基是否被污染，比如查看培养基的原材料、配制过程、灭菌条件是否合规。确保在灭菌时压力、温度、时间等参数达到要求，能够有效杀灭微生物。同时，检查平皿、移液管等器具的灭菌情况，看包装是否破损导致污染。

其次是样品。如果样品本身含有大量霉菌或者在检验前样品就已经被污染，会出现这种情况。需要回顾样品的采集过程是否规范，其储存条件是否符合要求，有没有可能在采集后到检验前的过程中接触到霉菌污染源。

然后是操作环节。尽管操作环境沉降和表面无霉菌，但操作过程可能引入污染。比如检验人员的衣物、双手是否清洁，操作是否严格按照无菌操作规范进行，在稀释、接种等步骤是否有可能带入外界霉菌。

初雪霁晴

小树冲冲 发表于 2025-1-5 11:16
当阴性对照都长很多霉菌的时候，在排除放置环境无异常的时候，就要带着棒球棒找厂家了。

恒温培养箱内环境可能有影响吗，培养皿都是带盖培养的

初雪霁晴

卷卷12 发表于 2025-1-5 11:44
首先确认所谓的所有培养皿（包括阴性对照）都长很多霉菌，这些霉菌是不是都是同一类的，然后看下有没有用的 ...

是同一类的，就是不知道从哪带入的

好吧那就这样吧

当阴性对照都长很多霉菌的时候，在排除放置环境无异常的时候，就要带着棒球棒找厂家了。

清翎

小树冲冲 发表于 2025-1-5 11:16
当阴性对照都长很多霉菌的时候，在排除放置环境无异常的时候，就要带着棒球棒找厂家了。

太逗了，一大早笑死。

小树冲冲

初雪霁晴 发表于 2025-1-5 11:51
恒温培养箱内环境可能有影响吗，培养皿都是带盖培养的

培养时没有包装呼吸带吗？

咒逐

小树冲冲 发表于 2025-1-6 09:33
培养时没有包装呼吸带吗？

培养还搞呼吸袋么，呼吸袋不是灭菌后防止污染用的么...说实话我个人在放置方法正确时极少怀疑培养环境会出问题，至少没见过。

但是，培养基阴性出霉菌我经手过，最后调查的结论是水浴锅水污染，因为锅里水样中发现了相同霉菌，而同批次无论瓶身、纸箱都没有查找到-我这里除了环监用这种短时间大量使用是自配外，商业批用的商品培养基。

当然这里得看楼主用的啥，是自配还是商品。

静待花开1234510

确认灭菌过程有没有问题

greatwolf

1、确认培养皿、培养基是否正常，尤其是那种一次性培养皿和自制的培养基。
2、培养操作：有没有按规定正确放置培养皿（即培养皿内部有没有可能在培养时受污染）
3、培养箱内部环境检测，是否存在大量的该类霉菌污染。

初雪霁晴

小树冲冲 发表于 2025-1-6 09:33
培养时没有包装呼吸带吗？

培养没有呼吸袋

初雪霁晴

咒逐 发表于 2025-1-6 10:48
培养还搞呼吸袋么，呼吸袋不是灭菌后防止污染用的么...说实话我个人在放置方法正确时极少怀疑培养环境会 ...

购买的干粉培养基自己配制灭菌的。水浴锅出霉菌我之前也有过，是很少量的，这次同一天做的所有样包括阴性都长很多同一类型的霉菌，怀疑灭菌器灭菌效果不行了，还没有验证出来

初雪霁晴

静待花开1234510 发表于 2025-1-6 13:24
确认灭菌过程有没有问题

灭菌过程没发现异常，但我确实怀疑灭菌效果不好了，要不然这么大范围的霉菌实在想不通。有没有可能满载热穿透力不行了，但表面上看不出来。主要现在手里没有指示剂做验证。

咒逐

初雪霁晴 发表于 2025-1-6 16:18
灭菌过程没发现异常，但我确实怀疑灭菌效果不好了，要不然这么大范围的霉菌实在想不通。有没有可能满载热 ...

上次做再确认是啥时候？我们那时候报告水浴锅水污染是只有一次检验过程出现，你说个大范围，是多次出现？

初雪霁晴

greatwolf 发表于 2025-1-6 14:51
1、确认培养皿、培养基是否正常，尤其是那种一次性培养皿和自制的培养基。
2、培养操作：有没有按规定正确 ...

第三条我再排查一下，培养箱环境中微生物会进入到培养皿中吗。我主要怀疑一次性培养皿和培养基的灭菌效果出现问题，还没验证出来。

小树冲冲

清翎 发表于 2025-1-6 08:29
太逗了，一大早笑死。

忍住      

初雪霁晴

咒逐 发表于 2025-1-6 16:28
上次做再确认是啥时候？我们那时候报告水浴锅水污染是只有一次检验过程出现，你说个大范围，是多次出现？

上次是第三方校验，但不做满载，满载已经很长时间没做过了。最近这个问题多次出现了。

胜利者

操作失误
检测环境