积累关于《中国药典》检验方法的经验与心得

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不定期的会在此话题下分享关于《中国药典》中中药材及饮片在检验中遇到的问题和解决方案

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先搞一个出来吧

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肉苁蓉含量检测
2020版《中国药典》肉苁蓉含量要求检验松果菊苷和毛蕊花糖苷
检验方法中色谱条件为
色谱柱：C18
流动相：甲醇-0.1%甲酸 梯度27分钟
波长：330
没有规定柱长、粒径、内径、柱温等信息
遇到的问题：按照以上方法使用250*4.6*5的类型色谱柱，27分钟内不能出两个峰，往往第一针的其中一个成分会跑到第二针
解决方法：
解决方法有两种。第一，使用柱长为150的色谱柱。第二，改变一下梯度表，将时间变长，参考如下梯度，其余不变
时间（分钟）        流动相A（%）        流动相B（%）
0～25                  26.5                  73.5
25～26              26.5→29               73.5→71
26～50                   29                            71
50～55               29→40                 71→60
55～60                   40                            60
以上方法仅供参考，方法学验证等需要根据不同实验室情况自行决定做与不做

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胡芦巴含量检测
2020版《中国药典》胡芦巴含量要求检验胡芦巴碱
检验方法中色谱条件为
色谱柱：C18
流动相：甲醇-0.05%十二烷基磺酸钠溶液-冰醋酸（20∶80∶0.1）
波长：265
没有规定柱长、粒径、内径、柱温等信息
遇到的问题：第一，此检验方法中用到十二烷基磺酸钠，费色谱柱。第二，平衡不好的话保留时间波动很大，需要很长时间来平衡以达到保留时间稳定
解决方法：
因为胡芦巴碱为小分子碱，极性很大，在反向色谱中几乎不保留，所以会用到十二烷基磺酸钠以碳十八反向色谱柱模拟离子交换色谱提高保留时间。
所以可以考虑使用正向色谱，例如使用氨基柱，具体方法如下：
色谱柱：氨基柱
流动相：乙腈-水（85-15）。流动相比例可以按照出峰时间适当调整，保证出峰时间在15~30分钟之间最好，供试品中相应峰分离度大于1.5
注意：正向色谱中，水相比例越大，出峰时间越早
以上方法仅供参考，因为换了色谱柱填料，按照《中国药典》0512 高效液相色谱法的要求。方法学验证要做。做检验对比。

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药材和饮片检测确实比较麻烦。

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千金子含量检测
2020版《中国药典》千金子含量要求检验千金子甾醇
检验方法中色谱条件为
色谱柱：二甲基十八碳硅烷键合硅胶
流动相：正己烷-乙酸乙酯-乙腈（87.5∶10∶2.5）
波长：275
没有规定柱长、粒径、内径、柱温等信息
遇到的问题：这种色谱柱用的比较少，一般实验室没有，没有的情况下可以使用C18。条件允许的话就按照药典要求做，以下方法适合没有相应色谱柱，有需要及时检验的情况可以参考一下
解决方法：
色谱柱：C18
流动相：甲醇-水（69-31）。流动相比例可以按照出峰时间适当调整，保证出峰时间在15~30分钟之间最好，供试品中相应峰分离度大于1.5
其他条件不变
注意：反向色谱中，有机相比例越大，出峰时间越早
以上方法仅供参考，因为换了色谱柱填料，按照《中国药典》0512 高效液相色谱法的要求。方法学验证要做。做检验对比。

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槟榔含量检测
2020版《中国药典》槟榔含量要求检验槟榔碱
检验方法中色谱条件为
色谱柱：强阳离子交换键合硅胶为填充剂（SCX-强阳离子交换树脂柱）
流动相：乙腈-磷酸溶液（2→1000，浓氨试液调节pH值至3.8）（55∶45）
波长：215
没有规定柱长、粒径、内径、柱温等信息
遇到的问题：槟榔碱也是小分子碱，但《中国药典》用的是阳离子交换柱，你要是用药典的流动相很不容易能做成功，因为PH或其他原因，如果能做好那请忽略本方法，做不出来可以参考以下方法
解决方法：
色谱柱：阳离子交换柱（SCX）
流动相：乙腈-（0.2%磷酸0.2%三乙胺）（10-90）。这样的话PH大概就是3.8左右
其他条件不变
以上方法仅供参考，做过好多次，用这个方法比较稳定