以黄芩苷为活性物做擦拭取样回收率验证的问题

月亮pzy

整个实验过程就是：
①黄芩苷对照品储备液（0.721mg/ml）→稀释后作为残留物溶液：80%、100%（0.0721mg/ml）、120%→吸取残留物溶液1ml涂布在不锈钢板上后进行擦拭取样，同时也做了空白（流动相）→拭子加10ml甲醇超声10分钟→上机
②将三个残留物溶液10倍稀释后上机，以100%残留物溶液稀释10倍后的溶液作为对照

问题是：
①残留物溶液稀释十倍后的溶液峰面积：80%-约20.5w，100%-约18.8w，120%-约27w（三个不成比例）；
擦拭取样回收的三个溶液峰面积：80%-约18.5w，100%-约22.5w，120%-约26.5w（每个浓度两人平行擦拭三个样，但每个浓度总有那么两三个点相较于其他偏低）。
一开始怀疑是我将80%和100%的10倍稀释溶液弄反了导致三个溶液峰面积不成比例（即使反过来其实也不成比例），但问题在于擦拭取样回收的三个溶液无论以80%还是100%作对照，回收率都高于100%。
②由另一人重新对残留物溶液进行十倍稀释测出的峰面积：80%-约16.5w，100%-约17.5w，120%-约23w
由于对比第一次十倍稀释的溶液峰面积变化很大，且不成比例，又进行了第三次对残留物溶液的十倍稀释，测出的峰面积：80%-约16.2w，100%-约13w，120%-约24.5w

我们好几个人想了很久都找不出到底什么原因，这个峰面积变化毫无规律可言，仪器设备也没问题，样品架能控温，也有开空调，配制储备液时也确定全部溶解了……希望大家可以提供一些思路，谢谢！

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志在超越

取样回收率没有问题，三次不同试验结果均没有重现性，可能是系统上问题，建议排查以下三点:
1、是否是使用尼龙滤头？建议更换PTFE滤头尝试。
2、是否有杂质峰引入？建议调整流动性比例或更换高性能色谱柱等确认。
3、是否进行方法稳定性、线性范围等确认？建议确认方法适用范围。

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门门

黄芩苷对照品储备液（0.721mg/ml）中，溶质未充分溶解。

wsx

首先，系统适用性做了没有，是否符合要求。看你这个峰面积那么高是否超载了。继续分别稀释10倍 20倍 50倍试试

loveaysl

此浓度的检验方法回收率有没有问题？   做的空白棉签擦拭空白板一点干扰都没有？

懒人下书

黄芩苷几乎不溶于水，难溶于甲醇、乙醇，可溶于含水醇和热乙酸。可能擦拭溶剂很难溶解黄芩苷。