反向液相色谱柱清洗步骤（安捷伦+岛津+WATERS）

液相色谱柱修复

液相色谱柱也被称为液相色谱的“心脏”，是分离效能的核心部分，那么日常的冲洗对提高实验效率、降低实验室成本都有重要意义。日常使用过程中如果出现如下几个情况，就需要对色谱柱进行清洗（本文主要适用反相色谱柱）：

1、  柱压高；

2、  分离效能降低；

3、  峰变形；

4、  柱效降低；

5、  柱子存储一段时间。

液相色谱柱厂家说明书里面推荐的冲洗步骤，经常看到用某溶剂冲洗10倍柱体积，那么柱体积如何精确计算呢。OK，上公式(见附件)！

根本算不出来有没有，有没有！OK，没有问题。降低难度，直接查下面这个表就OK了

        

Column   Dimension
   
   

      

Column   Volume
   
   

  
   

4.6 mm I.D. x 250 mm L
  
  

  

4.2 mL
  
  

   

4.6 mm I.D. x 150 mm L
  
  

  

2.5 mL
  
  

   

4.6 mm I.D. x 50 mm L
  
  

  

0.8 mL
  
  

   

3.0 mm I.D. x 250 mm L
  
  

  

1.8 mL
  
  

   

3.0 mm I.D. x 150 mm L
  
  

  

1.1 mL
  
  

   

3.0 mm I.D. x 50 mm L
  
  

  

0.4 mL
  
  

   

2.1 mm I.D. x 150 mm L
  
  

  

0.5 mL
  
  

   

2.1 mm I.D. x 100 mm L
  
  

  

0.3 mL
  
  

   

2.1 mm I.D. x 50 mm L
  
  

  

0.2 mL

确定好冲洗体积，下一步为了明确冲洗的原理，把冲洗溶剂极性表附一下(见附件)

在下面把安捷伦、岛津、WATERS三大主流品牌推荐的反相液相色谱柱冲洗条件汇总（同规格的其它品牌柱子都可以借鉴使用），具体如下：

安捷伦推荐冲洗条件：

1、断开色谱柱与检测器的连接，将清洗溶液排入烧杯；

2. 先使用不含缓冲盐的流动相（水/有机溶液）。冲洗 10 到 20 倍柱体积；

3. 接下来用 100% 有机溶剂（甲醇或乙腈）；

4. 检查压力是否已经恢复正常，如果没有则进行第5步骤；

5. 丢弃色谱柱或考虑采用更强的条件，如75% 乙腈/25%异丙醇；

6. 选用 100% 异丙醇、100%二氯甲烷或 100% 己烷（如果您采用二氯甲烷或己烷，需在使用前以及返回到反相流动相之前用异丙醇冲洗色谱柱）

备注：对于填料颗粒小于1.8μm的色谱柱，不要反冲色谱柱，应更换色谱柱。

岛津推荐的冲洗条件：

1、先试用含5-20%溶剂（甲醇、乙腈等）的水溶液（5倍柱体积）冲洗，流速：1.0 mL/min（下同）；

2、用100%溶剂（甲醇、乙腈等）冲洗（5倍柱体积）；

3、用100%溶剂（四氢呋喃、异丙醇等）冲洗（10倍柱体积）；

4、重复步骤2；

5、重复步骤1；

6、使用工作流动相替换溶剂。

WATERS推荐的冲洗条件：

1、先移除预柱；

2、应使用色谱级试剂冲洗（20被柱体积）；

3、如果是使用的极性样品进样，应依次使用如下溶剂冲洗：水、甲醇、四氢呋喃、甲醇、水、流动相；

综上3家液相色谱柱厂家推荐的条件，相信大家对反相液相色谱柱的冲洗有了全面的了解，当然如果冲洗解决不了的情况就可以考虑柱子修复，修复就是要打开色谱柱进行“手术”了，胆大心细当然经验也很重要哈！

液相色谱柱修复

还是比较常用的

连头发丝都写着

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