不同型号色谱柱测定含量结果差异很大

fanzhenj

在进行佛手含量测定方法确认时，发现用的2个不同的色谱柱对同一批样品测定含量结果差异过大。后来用同一个液相色谱仪、同一个对照品和样品，用2个色谱柱分别测试了下，结果也是一样。方法如下：色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸（33:63:2）为流动相；检测波长为284nm。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于5000。

对照品溶液的制备 取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含15μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备 取本品粉末（过五号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含橙皮苷（C28H34O15）不得少于0.030%。

其中安捷伦ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6*250mm,5um)色谱柱的测定的对照品和样品峰面积分别为276.906、130.308，依利特SionChrom ODS-BP(4.6*250mm,5um)色谱柱的测定的对照品和样品峰面积分别为277.939、164.342。可以看出对照品峰面积基本是一致的，但是样品峰面积差异却很大，就峰面积而言164.342/130.308=1.26，差距达到了26%。但是2个柱子都是C18的。这种情况如何判断哪个检测结果是正确的？遇到类似的问题，色谱柱如何选择？

wjcking123

你这个样品的出峰时间不一致啊。你调整下尽量使二个色谱柱的出峰时间一致，你在看看

尹飞

不同色谱柱也必须要规格一致，填料粒径、 色谱柱长度等

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fanzhenj

尹飞 发表于 2023-11-27 09:01
不同色谱柱也必须要规格一致，填料粒径、 色谱柱长度等

是一致的，都是4.6*250mm，5um的，而且都是C18的

可亲可爱

不要说不同品牌的柱子是不一样，相同品牌不同批号也不会不一样，你用同一根柱子，把流动相调整一下，不同保留时间，那个峰面积也是不一样的

764404592

我们也碰到过，都是C18柱，同样的色谱条件，一个做出来能有2个峰，一个做出来就一个峰

aiwoyzy1985

对照品是纯净的，供试品不一定，有多光谱扫描数据么

15166990092

建议看一看这两个柱子样品峰前后峰的大小和个数，是不是峰面积大的柱子分不开?

duyiwei

即使都是C18柱，不同厂家其填料参数会有差异，如表面积、孔径、碳载量方面

fanzhenj

15166990092 发表于 2023-11-27 10:36
建议看一看这两个柱子样品峰前后峰的大小和个数，是不是峰面积大的柱子分不开?

对比了，峰面积大的杂质峰反而更多，而且分的更开

小孔同志

建议你对比两个色谱柱的键合方式、封尾方式、以及含碳量这些信息（柱长、粒径这些肯定都是一样的），不同的色谱柱对于物质的保留能力是有差异的，你可以计算一下两根柱子的含量计算结果应该是一致的

15166990092

duyiwei 发表于 2023-11-27 10:45
即使都是C18柱，不同厂家其填料参数会有差异，如表面积、孔径、碳载量方面

对啊，特别是中药所含成分太复杂了

15166990092

fanzhenj 发表于 2023-11-27 11:20
对比了，峰面积大的杂质峰反而更多，而且分的更开

还要看看峰面积，中药里所含成分太多

阿西达卡

对照品的峰面积基本一样，只是样品的变化很大，感觉是样品的问题，想想样品回流中间出现过什么情况，排除一下

fanzhenj

阿西达卡 发表于 2023-11-27 13:55
对照品的峰面积基本一样，只是样品的变化很大，感觉是样品的问题，想想样品回流中间出现过什么情况，排除一 ...

2次检测的用的是同一个样品，就是为了确定是不是色谱柱的问题。除了色谱柱，其他条件都一样的，这也是很困惑的地方。

AMZljz

可能供试品峰不纯，可以DAD测一下，然后调整一下流动相比例（须符合通则要求）

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123升水

为什么一定要一模一样呢，就算是同一品牌，同一类型的柱子。走出来结果也会有所差异。只要保证目标物质可以完全分离，达到定量或定性要求就好了。、