分析方法色谱柱

蒸蒸日上路人亿 · 发表于 2023-5-24 21:14:59

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请教大家一个问题，分析方法开发使用过程中有没有碰到过这样的情况：色谱柱柱效下降很快，连续使用拖尾因子每天约增加0.1，流动相是10mM乙酸铵/乙腈体系，柱温35℃，流速1.0ml/min，进样5ul,样品溶剂90%的甲醇，色谱柱C18(pH2~11),柱效下降太快了，感觉不正常，可能是哪里的原因呢？恳请路过大神赐教，谢谢

落泪的蝴蝶 · 发表于 2023-5-25 08:38:26

有没有换一根柱子试试？

佛手罗汉 · 发表于 2023-5-25 08:40:37

缓冲盐的流动相费柱子，但也没这么快的。是不是你样品本身的性质决定的？？

唐e3phf8pp · 发表于 2023-5-25 08:40:38

最简单的办法联系你们买的色谱柱的技术，那边应该能针对性解答

落泪的蝴蝶 · 发表于 2023-5-25 08:40:39

方法完全是自己开发的吗？

ljychg@163.com · 发表于 2023-5-25 08:55:28

我们有品种也是含盐流动相、溶剂中有甲醇，柱效下降快。
后来发现是色谱柱中有盐沉积了，把柱效低的柱子打开，把筛板用纯化水清洗，再装好就好了。
你可以试试

琥珀主 · 发表于 2023-5-25 09:43:45

流动相体系没问题，这种体系没那么伤柱子。
那原因可能就是样品中有东西残留在色谱柱里出不来，与C18链结合，对你的样品产生了竞争性的影响，因此拖尾因子慢慢变大。
你可以考虑按说明书做一个活化再生看看。

肉肉快到碗里来 · 发表于 2023-5-25 09:44:07

肯定有一部分是盐析的原因，低浓度的盐遇到高浓度的乙腈，会产生盐析情况，还有连续使用，估计冲柱的时间都没得。另外你们的柱子本身是几百到1000多的那种，比如月旭，中谱或中谱红，不保护好柱子，下降肯定快

jingpaiqc · 发表于 2023-5-25 09:55:32

1.这根色谱柱本身的质量确实有问题，装填有差异。可以换换其他品牌的同类型柱子试试
2.水、试剂、有机溶剂的级别和质量，有没有严格过滤
3.样品本身的性质比如说吸附性比较强，越走越拖尾。确定是样品的原因的话可以在每一针样品之间插一针空走流动相，或者加前冲洗/后冲洗。
4.相对来说，盐和乙腈的体系，比较容易使盐聚沉，如果不是梯度，可以混成一相，混匀多次过滤下，还有就是用泵的底部通道走盐。
5.色谱柱的柱效不能通过样品的来评判，应该在验收的时候用比如萘甲醇去测试，用一段时间之后再次用萘甲醇测试，来评判柱效。柱子和样品之间相互有选择性，走这个样品不行不代表这根柱子的柱效不行了。
6.看你这个方法，流动相和样品溶剂不一样，溶剂强度存在差异（溶剂效应）均会导致峰型变差，拖尾等问题。可以用流动相溶剂样品试试。

蒸蒸日上路人亿 · 发表于 2023-7-13 12:50:07

ljychg@163.com 发表于 2023-5-25 08:55
我们有品种也是含盐流动相、溶剂中有甲醇，柱效下降快。
后来发现是色谱柱中有盐沉积了，把柱效低的柱子打 ...

谢谢

蒸蒸日上路人亿 · 发表于 2023-7-13 12:51:35

琥珀主发表于 2023-5-25 09:43
流动相体系没问题，这种体系没那么伤柱子。
那原因可能就是样品中有东西残留在色谱柱里出不来，与C18链结 ...

彻底活化一下，柱效可以上升，非常感谢

蒸蒸日上路人亿 · 发表于 2023-7-13 12:56:39

jingpaiqc 发表于 2023-5-25 09:55
1.这根色谱柱本身的质量确实有问题，装填有差异。可以换换其他品牌的同类型柱子试试
2.水、试剂、有机溶剂 ...

非常感谢你的回复，收益良多。确实如你所说，萘甲醇柱效测试结果不错，方法是梯度，可能样品中物质强吸附导致，普通冲洗没有效果，色谱柱活化柱效才能恢复。

蒸蒸日上路人亿 · 发表于 2023-7-13 12:59:16

琥珀主发表于 2023-5-25 09:43
流动相体系没问题，这种体系没那么伤柱子。
那原因可能就是样品中有东西残留在色谱柱里出不来，与C18链结 ...

谢谢，确实如您所说。牛

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