菌种传代

记忆de一角

从平板保存到磁珠里面是不是传代

xufan0007

菌种保存常见问题问答汇总：
1.菌株保存的是第三代，-80℃保存，再取出来活化的话属于第几代？

答：保存的是第三代复活出来后，如果采用平板或肉汤活化相当于转接了一代，就是第四代了，如果还在瓷珠里的话就还是原来的代数。如果是保存在斜面上，这一支斜面一直就是第三代，如果转接到另一支斜面就是第四代了。传代原则，菌株活化复苏不论以任何形式繁殖了一次就算是传了一代。但如果仅是物理位置的转移没有繁殖就不是传代，需要注意。

2.刚买回来的阳性菌株是第0代吗？

答：一般菌株你买回来的时候上面都会写明第几代，常规来说都是第0代的。像购买的ATCC或CICC的冻干粉都是标记为0代的。

3.菌株传代保存到瓷珠里一定要挑单菌落吗？

答：不一定非挑单菌落，但是一定要挑相同特征的菌落，就是说从同一个菌落纯化出来的，以保证它们的特性完全一致。原则是尽量多挑，宁多勿少。

4.菌株保存是-70℃还是-80℃有具体标准规定么？

答：其实是有标准的，《SN/T 2632-2010 微生物菌株常规保藏技术规程》是关于菌株保藏的一个标准，大家可以学习一下，各个保存方式都有介绍，但是瓷珠是比较新兴的保存方式暂时里面还没有收录。

5.怎样延长菌株的保存时间呢？

大量的实验证明菌株在低温、干燥、缺氧、缺营养的条件下保存效果是最好的，越接近这种保存条件，菌株的保存时间越长。

6.怎样纯化菌株？

纯化就是从TSA上或别的非选择性平板上转接一次，这就相当于纯化了。

7. 我们保存的一代菌株是不是要重新传代保存呢，认证老师会不会认为这是个错误？

答：应该不会，认证老师不会提出这种问题的，不过最好是一代菌株保存一些、二代菌株保存一些，使用时工作菌株最好使用第三代菌株，一代菌株可作为长期保存用。

8. 为何要将第三代作为工作菌株？

答：多传代几次后菌株的活力会明显提高，但最多传代到第五代后就不能用了，因为第五代后菌株虽然不会完全变异，但变异率会明显增加，因此选用第三代作为工作菌株是比较合适的，若使用第一、第二代菌株活力没有那么强。

9.用瓷珠管反复上下摇匀，有泡沫不容易吸出来，怎么办？

答：不必特别剧烈大尺度的摇动瓷珠管，稍微上下晃动就可以；如果确实有泡沫的话可以静置一会，让菌株多吸附一下瓷珠也是可以的。

10.  瓷珠管液体混匀可以吹吸吗？

答：不建议吹吸，因为空气里可能也带有部分的细菌，万一使用的枪头等有菌混进去就不太好了，直接拧紧保存管盖子后上下摇晃即可。

11. TSA斜面一般多少度保存，可以放在冷藏里吗？

答：2-8℃保存，放在冷藏是可以的；注意弧菌和绿脓杆菌要放到室温20-25℃保存，否则会很快死亡。

12.如果TSA斜面放在冷冻里面，会有什么影响？

答：琼脂冷冻后性状会发生改变，会变得很软，结构发生改变，所以不建议冷冻；如果要冷冻的话就采用甘油保存法或瓷珠保存法。

13.用瓷珠管保存产气荚膜梭菌老是保存不好！做好瓷珠管之后瓷珠管要放到厌氧袋里面再放到-20℃？

答：如果冷冻保存最好放在厌氧袋里再-20°保存，保存效果还可以；或者可以采用庖肉培养基保存，它是一种液体培养基，将产气荚膜梭菌接进去然后2-8 ℃保存，可以保存一年没有问题，在厌氧环境下保存效果最好。

  

陆游器

已收藏，楼上问答很通透。

joshua

xufan0007 发表于 2023-4-12 10:21
菌种保存常见问题问答汇总：
1.菌株保存的是第三代，-80℃保存，再取出来活化的话属于第几代？

很专业了，

但是架不住 现在行业里面蛇龙混杂，有的时候专业的碰上 一知半解的强势老师 还是得教你做人

xkdlzg

不错，值得学习

18188381753

学习了~         

周周世

值得学习学习

junqcq

xufan0007 发表于 2023-4-12 10:21
菌种保存常见问题问答汇总：
1.菌株保存的是第三代，-80℃保存，再取出来活化的话属于第几代？

学习了  谢谢分享

metterliu

学习一下，感谢分享

心雨秋

不错，值得学习

22311862

值得学习学习

汤圆不圆丶

xufan0007 发表于 2023-04-12 10:21
菌种保存常见问题问答汇总：
1.菌株保存的是第三代，-80℃保存，再取出来活化的话属于第几代？

答：保存的是第三代复活出来后，如果采用平板或肉汤活化相当于转接了一代，就是第四代了，如果还在瓷珠里的话就还是原来的代数。如果是保存在斜面上，这一支斜面一直就是第三代，如果转接到另一支斜面就是第四代了。传代原则，菌株活化复苏不论以任何形式繁殖了一次就算是传了一代。但如果仅是物理位置的转移没有繁殖就不是传代，需要注意。

2.刚买回来的阳性菌株是第0代吗？

答：一般菌株你买回来的时候上面都会写明第几代，常规来说都是第0代的。像购买的ATCC或CICC的冻干粉都是标记为0代的。

3.菌株传代保存到瓷珠里一定要挑单菌落吗？

答：不一定非挑单菌落，但是一定要挑相同特征的菌落，就是说从同一个菌落纯化出来的，以保证它们的特性完全一致。原则是尽量多挑，宁多勿少。

4.菌株保存是-70℃还是-80℃有具体标准规定么？

答：其实是有标准的，《SN/T 2632-2010 微生物菌株常规保藏技术规程》是关于菌株保藏的一个标准，大家可以学习一下，各个保存方式都有介绍，但是瓷珠是比较新兴的保存方式暂时里面还没有收录。

5.怎样延长菌株的保存时间呢？

大量的实验证明菌株在低温、干燥、缺氧、缺营养的条件下保存效果是最好的，越接近这种保存条件，菌株的保存时间越长。

6.怎样纯化菌株？

纯化就是从TSA上或别的非选择性平板上转接一次，这就相当于纯化了。

7. 我们保存的一代菌株是不是要重新传代保存呢，认证老师会不会认为这是个错误？

答：应该不会，认证老师不会提出这种问题的，不过最好是一代菌株保存一些、二代菌株保存一些，使用时工作菌株最好使用第三代菌株，一代菌株可作为长期保存用。

8. 为何要将第三代作为工作菌株？

答：多传代几次后菌株的活力会明显提高，但最多传代到第五代后就不能用了，因为第五代后菌株虽然不会完全变异，但变异率会明显增加，因此选用第三代作为工作菌株是比较合适的，若使用第一、第二代菌株活力没有那么强。

9.用瓷珠管反复上下摇匀，有泡沫不容易吸出来，怎么办？

答：不必特别剧烈大尺度的摇动瓷珠管，稍微上下晃动就可以；如果确实有泡沫的话可以静置一会，让菌株多吸附一下瓷珠也是可以的。

10.  瓷珠管液体混匀可以吹吸吗？

答：不建议吹吸，因为空气里可能也带有部分的细菌，万一使用的枪头等有菌混进去就不太好了，直接拧紧保存管盖子后上下摇晃即可。

11. TSA斜面一般多少度保存，可以放在冷藏里吗？

答：2-8℃保存，放在冷藏是可以的；注意弧菌和绿脓杆菌要放到室温20-25℃保存，否则会很快死亡。

12.如果TSA斜面放在冷冻里面，会有什么影响？

答：琼脂冷冻后性状会发生改变，会变得很软，结构发生改变，所以不建议冷冻；如果要冷冻的话就采用甘油保存法或瓷珠保存法。

13.用瓷珠管保存产气荚膜梭菌老是保存不好！做好瓷珠管之后瓷珠管要放到厌氧袋里面再放到-20℃？

答：如果冷冻保存最好放在厌氧袋里再-20°保存，保存效果还可以；或者可以采用庖肉培养基保存，它是一种液体培养基，将产气荚膜梭菌接进去然后2-8 ℃保存，可以保存一年没有问题，在厌氧环境下保存效果最好。

  

老师，我有个菌悬液使用的问题想请教一下，我们菌种是保存的二代瓷珠冻存管，用的时候拿出来接种在斜面培养基上制成工作菌（此时第三代），我把斜面加液体培养基培制成菌悬液使用，做样品需要菌含量不大于100cfu，所以菌悬液需要做稀释级确认，但是药典又规定除孢子菌悬液外其他菌悬液保存时间不能超过24h，问题就来了，24h可能稀释级结果都还没有出来而菌悬液就过期用不了了。怎么破啊

来自苹果APP客户端

xufan0007

汤圆不圆丶 发表于 2024-3-6 18:14
老师，我有个菌悬液使用的问题想请教一下，我们菌种是保存的二代瓷珠冻存管，用的时候拿出来接种在斜面培 ...

你好！我理解24小时指的是稀释成菌液后开始计算时间，并非活化就计算时间

汤圆不圆丶

xufan0007 发表于 2024-03-07 09:26
你好！我理解24小时指的是稀释成菌液后开始计算时间，并非活化就计算时间

对  是从稀释后开始计算  问题就是我稀释出来的我并不知道哪个稀释级满足不大于100cfu   所以这个稀释液我肯定要拿去涂布培养看看哪个稀释级别合适  培养一般也要接近24小时才出来结果  等到结果出来的时候我的菌悬液也就差不多失效了呀

来自苹果APP客户端

喵喵～酱

汤圆不圆丶 发表于 2024-3-8 10:41
对  是从稀释后开始计算  问题就是我稀释出来的我并不知道哪个稀释级满足不大于100cfu   所以这个稀释液 ...

同时做3个梯度的