浅谈体外溶出实验

翟翟1212

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体外溶出试验常用于指导药物制剂的研发、评价制剂批内批间质量的一致性、评价药品处方工艺变更前后质量和疗效的一致性等。普通口服固体制剂，可采用比较仿制制剂与参比制剂体外多条溶出曲线相似性的方法，评价仿制制剂的质量。溶出曲线的相似并不意味着两者一定具有生物等效，但该法可降低两者出现临床疗效差异的风险。

那该如何进行建立体外溶出实验方法呢？

1.      资料调研

对于仿制药研发来说，项目立项阶段通常会收集文献资料，如药物的溶解性、渗透性、pKa常数等理化性质，以及 FDA溶出数据库或日本橙皮书中的药物的溶出曲线或者FDA review官方披露的部分溶出曲线数据等，还有各国药典中收载的质量标准或进口注册标准及原料药质量标准等，帮助我们更快的了解药物性质，建立体外溶出实验方法。

2.      体外溶出实验方法建立及验证

2.1仿制药质量一致性评价中普通口服固体制剂溶出方法建立及验证

参考《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则》2016年第61号通告附件2，进行体外溶出方法开发。

A．装置选择

溶出试验推荐使用桨法、篮法，一般桨法选择50—75转/分钟，篮法选择50—100转/分钟。在溶出试验方法建立的过程中，转速的选择推荐由低到高。若转速超出上述规定应提供充分说明。

B. 溶出介质选择

考察药物在不同pH值溶出介质中的溶解度，推荐绘制药物的pH-溶解度曲线。

在确定药物主成分稳定性满足测定方法要求的前提下，推荐选择不少于3种pH值的溶出介质进行溶出曲线考察，如选择pH值1.2、4.5和6.8的溶出介质。对于溶解度受pH值影响大的药物，可能需在更多种pH值的溶出介质中进行考察。推荐使用的各种pH值溶出介质的制备方法见附件。

当采用pH7.5以上溶出介质进行试验时，应提供充分的依据。水可作为溶出介质，但使用时应考察其pH值和表面张力等因素对药物及辅料的影响。

C.溶出介质体积选择

推荐选择500ml、900ml或1000ml。

D.溶出曲线及溶出度时间点选择

溶出曲线取样时间点可为5和/或10、15和/或20、30、45、60、90、120分钟，此后每隔1小时进行测定。

溶出曲线考察截止时间点的选择：

以下任何一个条件均可作为考察截止时间点选择的依据。

（1）连续两点溶出量均达85%以上，且差值在5%以内。一般在酸性溶出介质(pH1.0—3.0)中考察时间不超过2小时。

（2）在其他各pH值溶出介质中考察时间不超过6小时。

溶出度取样点可参考各药典标准或进口注册标准进行确定，同时需根据该介质溶出曲线数据及限度进行适当调整。

E. 溶出介质优化

在截止时间内，药物在所有溶出介质中平均溶出量均达不到85%时，可优化溶出条件，直至出现一种溶出介质达到85%以上。优化顺序为提高转速，加入适量的表面活性剂、酶等添加物。

表面活性剂浓度推荐在0.01％—1.0%(W/V)范围内依次递增，特殊品种可适度增加浓度。某些特殊药品的溶出介质可使用人工胃液和人工肠液。

F. 测定法建立

    可选用UV或HPLC进行测定。测定方法可参考原料药含量方法及制剂进口注册标准或药典方法进行优化，尽量缩短测定时间及简化实验操作，如样品尽量不移液。

G.溶出方法的验证

方法建立后应进行必要的验证。溶出曲线验证中供试品样品可选用某个时间点样品（溶出度时间点）进行验证。耐用性除了考察测定方法的耐用性外还需考察不同溶出仪之间的溶出曲线差异性。多介质溶出曲线使用同一方法进行测定，耐用性可需用其中一个介质进行验证即可。

        

检测项目

   

验证项目

      

溶出曲线/溶出度

  
   

专属性

  

+

   

线性及范围

  

+

   

滤膜吸附

  

+

   

准确度

  

+

   

重复性

  

+

   

中间精密度

  

+

   

检测限

  

-

   

定量限

  

-

   

耐用性

  

+

2.2 豁免BE药物

根据ICH M9及《人体生物等效性试验豁免指导原则》判断是否符合豁免。

BCS是一种基于药物的水溶性和肠道渗透性特征的科学方法。BCS将药物分入下列四种BCS类别之一：

I类：高溶解性，高渗透性

II类：低溶解性，高渗透性

III类：高溶解性，低渗透性

IV类：低溶解性，低渗透性

基于BCS的生物等效性豁免适用于药物具有高溶解性，且具有高渗透性（BCS I类）或低渗透性（BCS III类）的药品。（高溶解性：37±1℃下，如果最高单次治疗剂量完全溶于250ml或更少的pH 1.2-6.8范围的水性介质中，则可认为该药物具有高溶解性。）

溶出方法可根据下表进行：

名称	ICH M9	人体生物等效性试验豁免指导原则    （2016年第87号文）
装置	桨法或篮法	桨法或篮法
溶出介质体积	900ml或更少（建议使用QC检测体积）	500ml（或更少）
搅拌	桨法-50rpm    篮法-100rpm	桨法-50rpm或75rpm    篮法-100rpm
溶出介质	pH1.2、pH4.5、pH6.8	0.1mol/L HCl或是不含酶的模拟胃液/ pH4.5、pH6.8

其他同2.1其他项下。

2.3已上市化学药品药学变更中的溶出曲线研究

根据2022年11月发布的《已上市化学药品药学变更研究技术指导原则（试行）》溶出曲线研究的问答，进行普通口服固体制剂的溶出曲线研究。

可根据下表进行：

曲线研究	具体内容
样品	变更后三批样品与变更前样品的代表性批次（如临床试验批、BE批或其他代表性批次）进行对比研究
样品数量	12个制剂单位
溶出介质	至少三种介质（0.1mol/L盐酸或pH1.2盐酸、pH4.5缓冲液、pH6.8缓冲液），标准介质如不同以上介质，增加标准介质。
装置	桨法50转或篮法100转。如在桨法每分钟50转观察到高变异或堆积效应，推荐使用篮法每分钟100转。某些标准介质的转速可能与以上不同，除标准介质外，其余介质通常不建议调整转速。
溶出介质体积	900ml或更少（建议使用注册标准所选择的体积）
溶出介质温度	37±0.5℃
取样点选择	应在完全相同的条件下对变更前后样品的溶出曲线进行测定，两条曲线的取样点应相同。建议选择有代表性的取样点，如：在5、10、15、20、30、45、60、90、120分钟取样（建议可根据产品特性选择），或采用其他适宜的时间间隔取样，直到药物溶出90%以上或达到溶出平台（溶出平台是指连续三个时间点任意两点之间溶出量相差不超过5%，如连续三个时间点溶出量均在30%-35%之    间）。建议15分钟及注册标准中的取样时间为必须的取样点，高溶解性药物首个取样点不超过10分钟。