关于细胞治疗用慢病毒载体和质粒质量标准的讨论

姣妹崽 · 发表于 2021-8-12 08:00:00

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本帖最后由姣妹崽于 2023-5-22 09:22 编辑

目前用于CAR-T细胞生产过程中基因修饰的载体主要是逆转录病毒载体、慢病毒载体和转座子系统。应使用在cGMP条件下生产，具有高品质并已经过全面质量检测的载体，其生产和质量控制应参考基因质量产品相关知道原则的要求。载体的生产方法须经过验证，证明它可以用控制的程序重复生产出安全有效的、质量一致的载体。对于逆转录病毒载体或慢病毒载体，通常检测的项目有：鉴别试验（转基因的RT-PCR法检测、限制性酶切法）、载体滴度、转染效率、活性、纯度、宿主细胞DNA、宿主细胞蛋白、参与牛血清蛋白、RCL、细菌内毒素、无菌试验等。如使用Sleeping Beauty（睡美人）和PiggyBac等转座子系统，应使用临床级质粒，并已进行相应检测。FDA已制定的质粒材料的质量标准为：＞85%超螺旋DNA，小于1%宿主细胞蛋白、＜1%残留细菌DNA（聚合酶链式反应测定），＜1%残留细菌RNA（高效液相色谱法或凝胶法检测不到），无菌试验，＜10EU/mg内毒素，A260/A280比为1.8~2.0。

摘自《生物技术药物研究开发和质量控制》（第三版）

其中，针对病毒载体所提出的检测项目除安全性指标RCL、细菌内毒素、无菌试验等安全性指标以及特异性鉴别试验（转基因的RT-PCR法检测、限制性酶切法）之外，载体滴度、转染效率、活性、纯度、宿主细胞DNA、宿主细胞蛋白、参与牛血清蛋白等指标均未有明确标准。

针对质粒DNA的要求，病毒载体包装用的质粒和直接转染细胞的质粒DNA在质量要求上是否相同，如有差异，各自按照何种标准执行？对于FDA制定的质粒材料（上述）的标准，宿主蛋白、DNA及RNA残留等按照百分比方式控制是否合理？

欢迎补充参考资料。

2018.10王军志主编一生物技术药物研究开发和质量控制（第3版）
https://www.ouryao.com/forum.php?mod=viewthread&tid=659015&fromuid=317050
(出处: 蒲公英 - 制药技术的传播者 GMP理论的实践者)

姣妹崽 · 发表于 2021-11-28 18:14:42

dannie1991 发表于 2021-11-26 15:36
楼主好，求《生物技术药物研究开发和质量控制》（第三版），谢谢！
邮箱 yin_dan1991@163.com

已发送，请及时查收

珈蓝 · 发表于 2021-8-12 10:04:01

每个字都认识，连起来就不认识了，，细胞治疗产品太高大上了，没接触过

期待GMP · 发表于 2021-8-12 11:15:14

每个项目的限度标准确实很难找。

姣妹崽 · 发表于 2021-8-12 13:08:26

期待GMP 发表于 2021-8-12 11:15
每个项目的限度标准确实很难找。

就很迷

好奇CDE的审核有没有在这方面做出规定

期待GMP · 发表于 2021-8-12 13:27:45

姣妹崽发表于 2021-8-12 13:08
就很迷
好奇CDE的审核有没有在这方面做出规定

你有《生物技术药物研究开发和质量控制》第三版这本书吗？4547078462qq.com

Haylic · 发表于 2021-8-12 14:09:36

在《生物技术药物研究开发和质量控制》（第三版）中的P883页开始讲了几种病毒载体类基因治疗药物
在P919页以“种族人干细胞生长因子质粒DNA质量标注作为参考，列举了含量测定、A260/280比值、宿主蛋白残留量、基因组DNA残留量等项目的检测方法和规定标准。
可以作为一个参考一下，不过没有明确的标准确实有些难

小猪吃你 · 发表于 2021-8-12 14:40:50

Haylic 发表于 2021-8-12 14:09
在《生物技术药物研究开发和质量控制》（第三版）中的P883页开始讲了几种病毒载体类基因治疗药物
在P919页 ...

你这质粒和慢病毒包装质粒是两码事，不做参考吧

小猪吃你 · 发表于 2021-8-12 14:45:34

从使用目的上来说病毒载体包装用质粒和直接转染细胞的质粒肯定不是一样的要求，病毒载体包装用质粒是作为病毒载体的原材料，通过293细胞转染产出病毒载体，再转导T细胞制备CART，直接转染细胞的质粒应该是类似电转直接转导进T细胞制备CART，一个原材料的原材料，一个是原材料，现在病毒载体好像按药品管

姣妹崽 · 发表于 2021-8-13 11:53:32

本帖最后由姣妹崽于 2021-8-13 11:59 编辑

期待GMP 发表于 2021-8-12 13:27
你有《生物技术药物研究开发和质量控制》第三版这本书吗？4547078462qq.com

你的邮箱号好像有问题额

姣妹崽 · 发表于 2021-8-13 12:00:06

珈蓝发表于 2021-8-12 10:04
每个字都认识，连起来就不认识了，，细胞治疗产品太高大上了，没接触过

听起来高大上，落到实处都是一件件事、一项项技术

姣妹崽 · 发表于 2021-8-13 12:11:36

小猪吃你发表于 2021-8-12 14:45
从使用目的上来说病毒载体包装用质粒和直接转染细胞的质粒肯定不是一样的要求，病毒载体包装用质粒是作为病 ...

关于质粒，病毒包装用的质粒按照直接转染细胞用的质粒的标准进行管理，应该是肯定没问题的吧。
关于病毒，如果按照病毒载体类的基因治疗药物来进行管理是不是也算合理。
以上两种需要考虑按照较高的质量标准执行时，相应的成本问题

我的小宝贝 · 发表于 2021-8-28 15:13:15

姣妹崽发表于 2021-8-13 11:53
你的邮箱号好像有问题额

327501749@qq.com谢谢您啦

姣妹崽 · 发表于 2021-8-30 09:31:52

我的小宝贝发表于 2021-8-28 15:13
谢谢您啦

已发送、请查收

SunYH · 发表于 2021-9-1 19:40:00

生物技术药物研究开发和质量控制第三版能发我一份吗？279036628@qq.com

水天一色1 · 发表于 2021-9-22 15:45:10

求《生物技术药物研究开发和质量控制》（第三版），79396598@qq.com

hhhy · 发表于 2021-9-24 16:39:30

求《生物技术药物研究开发和质量控制》（第三版），helenhhy@126.com，谢谢！

stella111 · 发表于 2021-9-29 13:30:02

求《生物技术药物研究开发和质量控制》（第三版），kangzhuang1992@yeah.net，谢谢！

heijinfree · 发表于 2021-10-7 21:57:38

求《生物技术药物研究开发和质量控制》（第三版），heijinfree@126.com，谢谢！

姣妹崽 · 发表于 2021-10-8 09:10:58

heijinfree 发表于 2021-10-7 21:57
求《生物技术药物研究开发和质量控制》（第三版），，谢谢！

已发送，请注意查收

姣妹崽 · 发表于 2021-10-8 09:11:13

SunYH 发表于 2021-9-1 19:40
生物技术药物研究开发和质量控制第三版能发我一份吗？

已发送，请注意查收

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