微生物适用性检查

18569405948

我们做微生物适用性检查的时候，药典上说所加菌液不大于100cfu，是什么意思，是一定要小于100cfu吗，那长几个，如果回收率达到了，可行吗

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咒逐

制备新成熟的2-3支黑曲霉，各自取孢子做悬液，悬液分别混匀分装30支1.5ml，2-8℃冷藏，0.1.2.3.4.5.6.7.8.9.10周做4.5.6次稀释计数（我这里要求成熟度比较高，浓度比较大。根据实际情况，也可以在0次的时候多稀释两个级比如3-7，以后以10^2级以及前后两个级做三级稀释）。计数以可计数开始的两天连续结果计（快的话过36小时就能看到小白绒球状的菌丝团，没有明显的还没长大的菌丝团就可以计数了），菌数差异在在10%以内计小值，超过计大值，求得菌液浓度。
做完，或者培养120小时时成熟度不足以计数，或菌液浓度不足0天一半，即停止测试。
取培养时间均值、菌落数均值，做活性衰减图、菌液浓度衰减图。重复性平行试验结果取衰减最快作为参考，选择活性衰减（考虑产品是否抑真菌）、浓度衰减范围合适的周数作为效期使用。

做完了以后，就是同样的方法配一批悬液，抽两只做个计数，确定稀释方法后，剩余的在效期内就可以直接用了。

个人做法。如有不对还请各位不吝赐教。这个东西做完写完吃灰了几年了，最多就有人问过做了效期没有，答复做过了也没有谁要求看文件。

补充内容 (2021-7-23 15:12):
前两天逛论文看到一篇药检所写的论文，个人看完觉得很有价值，现共享给大家。
[1]林吉恒, 肖璜, 马仕洪,等. 黑曲霉孢子悬液贮存期的验证[J]. 中国药品标准, 2014, 000(002):117-119.

补充内容 (2021-7-23 15:13):
站外链接：
https://www.doc88.com/p-19659446517012.html?r=1

咒逐

18569405948 发表于 2021-06-07 21:23
那这样的话，工作量很大啊

细菌先做菌群曲线，建议从16-24小时每2小时做一次，可以获得你的培养条件下（最好选用波动在1℃以内的培养箱）的菌液浓度曲线，重复1-2次。以此为依据使用一个确定的级就可以。其实细菌菌液加斜面菌苔一满环，在18-28小时间变化都会不会很大（我这里是10ml培养液的结论）。黑曲霉要做孢子悬液的效期，冷藏在两个月左右数量活性差异也不大，绝对能满足要求。只有白色念珠菌麻烦一点，在SDB中悬浮不起来，和临用振摇手法有关，个人经验人为差异是最难控制的一个。值得注意的是铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌易凝絮，控制时间要精准一点。

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后悔的孩子

虽没说可以是理解成行，但是建议不要以个位数的来作为回收率的计算依据。尽量选取50以上的做为回收率计算，这样方法的可靠性高。

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酒酿汤圆

后悔的孩子 发表于 2021-05-26 20:32
虽没说可以是理解成行，但是建议不要以个位数的来作为回收率的计算依据。尽量选取50以上的做为回收率计算，这样方法的可靠性高。

那问一下，有做菌液稀释梯度的验证么？如果不做，怎么保证每次稀释都能得到小于100cfu....

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火蝶

酒酿汤圆 发表于 2021-5-26 21:58
那问一下，有做菌液稀释梯度的验证么？如果不做，怎么保证每次稀释都能得到小于100cfu....

买定量菌株  溶解后按需求取一定量的就可以了

或者试验的时候多稀释几个梯度  都进行试验  并且进行菌落数复核  复核的哪个梯度符合要求  就选择哪个稀释梯度的结果为试验结果  

酒酿汤圆

火蝶 发表于 2021-5-27 08:33
买定量菌株  溶解后按需求取一定量的就可以了

或者试验的时候多稀释几个梯度  都进行试验  并且进行菌 ...

我们是定性菌株传代做，所以操作上或多或少会有点出入

火蝶

酒酿汤圆 发表于 2021-5-27 09:05
我们是定性菌株传代做，所以操作上或多或少会有点出入

知道啊  试验的时候多稀释几个梯度  都进行试验  比如我们实验室一般第四代菌液的浓度在10^7到10^8(根据长期试验数据总结的)  试验的时候  就要求准备1:10稀释过4-6次3个梯度的菌液  然后都进行试验   并且同步进行这3个梯度菌液的菌落数复核  根据菌落数复核结果  选择菌液浓度符合要求的那一梯度菌液进行的试验的结果作为有效结果

思绪＂

酒酿汤圆 发表于 2021-05-26 21:58
那问一下，有做菌液稀释梯度的验证么？如果不做，怎么保证每次稀释都能得到小于100cfu....

我们会做一个菌落计数

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佛系青年

稀释计数啊

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18569405948

火蝶 发表于 2021-05-27 09:32
知道啊  试验的时候多稀释几个梯度  都进行试验  比如我们实验室一般第四代菌液的浓度在10^7到10^8(根据长期试验数据总结的)  试验的时候  就要求准备1:10稀释过4-6次3个梯度的菌液  然后都进行试验   并且同步进行这3个梯度菌液的菌落数复核  根据菌落数复核结果  选择菌液浓度符合要求的那一梯度菌液进行的试验的结果作为有效结果

那这样的话，工作量很大啊

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咒逐

18569405948 发表于 2021-06-07 21:23
那这样的话，工作量很大啊

一般情况下，是不会出现超出100或者低于50的，有的走个偏差再做一遍就是。如果有可重现的曲线，还是两次验证菌液稀释不对，那就是过程出问题了。

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18569405948

咒逐 发表于 2021-06-08 09:27
细菌先做菌群曲线，建议从16-24小时每2小时做一次，可以获得你的培养条件下（最好选用波动在1℃以内的培养箱）的菌液浓度曲线，重复1-2次。以此为依据使用一个确定的级就可以。其实细菌菌液加斜面菌苔一满环，在18-28小时间变化都会不会很大（我这里是10ml培养液的结论）。黑曲霉要做孢子悬液的效期，冷藏在两个月左右数量活性差异也不大，绝对能满足要求。只有白色念珠菌麻烦一点，在SDB中悬浮不起来，和临用振摇手法有关，个人经验人为差异是最难控制的一个。值得注意的是铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌易凝絮，控制时间要精准一点。

黑曲霉的孢子悬液的效期，你们是怎么做的啊

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