HPLC检测含量，对照品和供试品都不出峰

平凡的葡萄糖 · 发表于 2018-3-28 09:01:18

您需要登录才可以下载或查看，没有帐号？立即注册

x

色谱检测某物质含量时，以前检测对照和供试都可以出目标峰，昨天突然检测不到目标峰；检查紫外检测器的能量和氘灯使用时间都可以，之后更换另外的色谱柱一样检测不到目标峰，也将流动相、对照重新配过，进样还是不出峰，很是奇怪；有没有大神解答疑惑，不胜感激，在线等.

hongwei2000 · 发表于 2018-3-28 09:07:17

先检查一下仪器设置参数（波长、流速、柱温等等）和流动相配置得是否正确

平凡的葡萄糖 · 发表于 2018-3-28 09:22:03

hongwei2000 发表于 2018-3-28 09:07
先检查一下仪器设置参数（波长、流速、柱温等等）和流动相配置得是否正确

这些检测条件都是正确的

hongwei2000 · 发表于 2018-3-28 09:24:17

平凡的葡萄糖发表于 2018-3-28 09:22
这些检测条件都是正确的

是否有漏液、流速是否准确
在低波长下（例如254nm以下）进一针丙酮溶液看是否有峰

平凡的葡萄糖 · 发表于 2018-3-28 09:33:35

hongwei2000 发表于 2018-3-28 09:24
是否有漏液、流速是否准确
在低波长下（例如254nm以下）进一针丙酮溶液看是否有峰

流动相和溶剂都单独进样，溶剂峰可以出来，但就是目标峰不出来，也把仪器系统重新复位配置，一样的结果不出峰，而更换另一种对照品检测，却可以出峰，你说奇怪不奇怪

huaiwanglei · 发表于 2018-3-28 09:36:45

检查泵压力是否正常，把色谱柱多冲冲再试一下看

hongwei2000 · 发表于 2018-3-28 09:36:49

平凡的葡萄糖发表于 2018-3-28 09:33
流动相和溶剂都单独进样，溶剂峰可以出来，但就是目标峰不出来，也把仪器系统重新复位配置，一样的结果不 ...

另一种对照品？
同一方法两种对照品？
如果仪器是正常的
一般的原因不外几乎
1、仪器参数方法不对
2、流动相不对
3、对照品不对或对照品溶液配制不同
4、色谱柱不对

平凡的葡萄糖 · 发表于 2018-3-28 09:41:09

hongwei2000 发表于 2018-3-28 09:36
另一种对照品？
同一方法两种对照品？
如果仪器是正常的

一药两种含量，两个检测方法，一个波长238nm，一个波长220nm，就是220的目标峰不出

平凡的葡萄糖 · 发表于 2018-3-28 09:42:39

huaiwanglei 发表于 2018-3-28 09:36
检查泵压力是否正常，把色谱柱多冲冲再试一下看

压力正常，色谱柱还是新的用的

710073509 · 发表于 2018-3-28 10:10:07

1.色谱柱型号不对；2.流动相配制，是否更换了新的试剂试药；3.对照溶液配制；4.是等度方法还是梯度方法，检查比列阀分配

平凡的葡萄糖 · 发表于 2018-3-28 10:42:43

710073509 发表于 2018-3-28 10:10
1.色谱柱型号不对；2.流动相配制，是否更换了新的试剂试药；3.对照溶液配制；4.是等度方法还是梯度方法，检 ...

1、色谱柱一直用同一型号
2、流动相所有试剂都是新开瓶
3、对照也是新开瓶
4、等度洗脱这些条件都没有变换。

herozxq · 发表于 2018-3-28 10:44:37

色谱微信群，加zorro_zheng，加时请提示制药.一可能是氘灯没点亮，二可能是信号线没连接好

平凡的葡萄糖 · 发表于 2018-3-28 10:49:08

herozxq 发表于 2018-3-28 10:44
色谱微信群，加zorro_zheng，加时请提示制药.一可能是氘灯没点亮，二可能是信号线没连接好

氘灯能量正常，可以点亮，信号线也没有问题。很烦恼

hongwei2000 · 发表于 2018-3-28 11:02:16

平凡的葡萄糖发表于 2018-3-28 09:41
一药两种含量，两个检测方法，一个波长238nm，一个波长220nm，就是220的目标峰不出

比较一下两个波长现在与之前的色谱图
波长相差不大
理论上两个波长下都会有两个峰存在
先看看存在的峰的峰位、峰形是否正常
必要的话可以用DAD看一下相应的峰位置

莫颜雨 · 发表于 2018-3-28 11:34:22

是不是自动进行器？应该是对照品和样品根本没有进入检测器，漏调了。我们以前也出现这样的情况。咨询下工程师。

莫颜雨 · 发表于 2018-3-28 11:50:03

我记得之前我们是进样器六通阀问题

平凡的葡萄糖 · 发表于 2018-3-28 13:09:46

莫颜雨发表于 2018-3-28 11:34
是不是自动进行器？应该是对照品和样品根本没有进入检测器，漏调了。我们以前也出现这样的情况。咨询下工程 ...

手动进样，六通阀的，我们进另外一种对照则可以出峰的

平凡的葡萄糖 · 发表于 2018-3-28 13:15:41

hongwei2000 发表于 2018-3-28 11:02
比较一下两个波长现在与之前的色谱图
波长相差不大
理论上两个波长下都会有两个峰存在

一个238nm处的峰和之前比对是一致的，而220nm处没有目标峰，检测器是紫外检测器，不能像二极管阵列检测器一样做全波长检测，咨询工程师说是紫外检测器的问题，麻烦

hongwei2000 · 发表于 2018-3-28 13:26:58

平凡的葡萄糖发表于 2018-3-28 13:15
一个238nm处的峰和之前比对是一致的，而220nm处没有目标峰，检测器是紫外检测器，不能像二极管阵列检测器 ...

你不是混合对照品溶液吗
如果是的话应该是一针两峰呀
无论是哪个波长
只不过峰大小不同而已

王李玉珏 · 发表于 2018-3-28 13:33:27

要么流动相问题，要么比例阀问题

[分析仪器] HPLC检测含量，对照品和供试品都不出峰