环境监测培养皿的高温与低温

快活王

最近与同事沟通环境监测培养皿的培养温度，当高温和低温都进行培养的时候，是先高温后低温还是先低温后高温。最后经过查阅USP等资料，确认了应该先高温后低温。但是为什么在FDA的无菌生产指南中，明确规定了培养基模拟实验的培养基应当先低温培养，然后再高温培养。这是为什么呢？各位战友还请指导。

werewolfman

培养基模拟培养是液体，可能考虑的是有菌和无菌，培养时间相对较长，即使短期受抑制，至少不会死亡，而环境监测培养时间短，目的考虑的避免假阴性。

火舞精灵

我们是先低温后高温  主因为培养基含水量有限  先高温培养的话  低温真菌培养会因为缺水而结果不准确

快活王

火舞精灵 发表于 2017-6-15 17:27
我们是先低温后高温  主因为培养基含水量有限  先高温培养的话  低温真菌培养会因为缺水而结果不准确

但是先高温后低温是USP上规定的啊，先低温后高温有可能会导致G+球菌的回收率偏低，这样做的话可能会被挑战啊

火舞精灵

我没注意过USP上的规定  但是FDA的检查官指导的时候也是先低温后高温的 因为环境中的菌落一般都不会太多  回收率我们没做过  即使洁净区空调系统验证 也没有  除了洁净区消毒效果验证里的生物指示剂

592750946

为什么培养皿要两种温度来培养?tsa不是30-35度培养五天就可以了没？

592750946

你要两种温度培养多少天，天数久了培养皿也会脱水吧

werewolfman

先高后低的方式是确实有楼主提到的那个考虑。不过按照惯例，培养基厂家也是这么建议的。其实这样对于霉菌，其实也需要考虑，不过通常环境中存在的都是细菌，

快活王

火舞精灵 发表于 2017-6-15 17:34
我没注意过USP上的规定  但是FDA的检查官指导的时候也是先低温后高温的 因为环境中的菌落一般都不会太多   ...

我之所以提这个问题就是被一个FDA检查官质疑了，所以查的法规，发现不一样，所以才奇怪。

快活王

werewolfman 发表于 2017-6-15 19:15
先高后低的方式是确实有楼主提到的那个考虑。不过按照惯例，培养基厂家也是这么建议的。其实这样对于霉菌， ...

我就想知道培养基模拟灌装为什么就是先低温后高温，是如何考虑的？

cqycredapple

培养基灌装是液体培养基，而且内包材都是密闭的，几乎培养过程中不会损失水分。所以不会存在微生物因水分减少而死亡。先低后高，还是先高后低，没有法规强制，只是推荐，先低只是为了防止不耐受高温的微生物在高温中死亡引起假阴性结果。

快活王

werewolfman 发表于 2017-6-15 21:34
培养基模拟培养是液体，可能考虑的是有菌和无菌，培养时间相对较长，即使短期受抑制，至少不会死亡，而环境 ...

那就是说除了G+球菌的抑制外，先低温后高温的培养方式还是比先高温后低温要好么？还请帮忙解惑。

一片红云

学习了，谢谢！

werewolfman

快活王 发表于 2017-6-15 22:33
那就是说除了G+球菌的抑制外，先低温后高温的培养方式还是比先高温后低温要好么？还请帮忙解惑。

个人觉得两种方式没有绝对的好与坏，只是在培养目的上某种方式可能存在优势，要从全面考虑，那种更适合，结合法规要求。选择培养方式。

song_85122

学习了，谢谢！

juanx

For many mesophilic organisms, recovery is possible over a range of approximately 20. In the absence of confirmatory evidence, microbiologists may incubate a single plate at both a low and a higher temperature. Incubating at the lower temperature first may compromise the recovery of Gram-positive cocci that are important because they are often associated with humans.
USP中的原话，英语好的请帮忙翻译。

快活王

juanx 发表于 2017-6-16 08:59
For many mesophilic organisms, recovery is possible over a range of approximately 20. In the absence ...

嗯嗯，就是最后一句，我的理解是首先从低温开始培养的话，可能会危机到G+球菌的回收率，这是重要的，因为其往往与人体相关。

juanx

快活王 发表于 2017-6-16 10:06
嗯嗯，就是最后一句，我的理解是首先从低温开始培养的话，可能会危机到G+球菌的回收率，这是重要的，因为 ...

我看到的翻译两个版本的都有，我英语不好。

快活王

juanx 发表于 2017-6-16 10:35
我看到的翻译两个版本的都有，我英语不好。

我的英语也不好，但是读出来的就是这个意思，部分蒲友反馈先高温后低温可能导致培养基水分丢失，咨询了培养基厂家，厂家反馈如果培养基水分丢失的话，无论是先高温还是先低温，都是一样的。对于培养基模拟灌装的时候建议先低温后高温，我现在更倾向于培养基模拟灌装的培养周期长，可能减少这个风险，而先高温的话有可能会导致某些低温培养的微生物死去。

juanx

我知道的是国内一家做无菌，过了FDA及欧盟审计，环境监测的碟子是先低温20~25℃培养4~5天后高温30~35℃培养2~3天