在做菌种梯度稀释时，是涂布法好还是倾注法好？

shanshuiqingyin · 发表于 2017-5-17 10:04:04

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请问一下各位老师，在做菌种梯度稀释进行培养时：1.是用涂布法好点还是用倾注法好点？用倾注法的话在摇匀过程中很容易把样品摇到一起，聚集在平板的中间，导致菌落无法均匀分布。2.梯度稀释需要进行离心去上清液吗？还是直接充分混匀就可以进行下一步操作？

a72736650 · 发表于 2017-5-17 10:15:22

一直用的倾注法。。先把菌液滴到皿内然后倒琼脂冲一下，还算均匀吧
反倒是涂布法，手笨涂不好

juanx · 发表于 2017-5-17 11:05:20

计数最好与你实验一致。实验是涂布就涂布计数，实验是倾注就倾注法计数，误差小。特别是枯草，有过惨痛经历。涂布没什么难的，平板的冷淋水不要太多

juanx · 发表于 2017-5-17 11:15:49

梯度稀释时不能离心取上清液。混匀过程多摇一会，不会很分散，但也不会都聚在一块

shanshuiqingyin · 发表于 2017-5-17 11:26:18

juanx 发表于 2017-5-17 11:05
计数最好与你实验一致。实验是涂布就涂布计数，实验是倾注就倾注法计数，误差小。特别是枯草，有过惨痛经历 ...

嗯嗯，很有用的建议呢，谢谢了！

shanshuiqingyin · 发表于 2017-5-17 11:32:10

juanx 发表于 2017-5-17 11:15
梯度稀释时不能离心取上清液。混匀过程多摇一会，不会很分散，但也不会都聚在一块

那就是可以离心之后把上清液去掉，然后取留下的沉淀咯，是这样子吗。。做过很多样品，比如颗粒剂的，(可能本人技术还不够好)在混匀过程中总是很容易就混到一起

shanshuiqingyin · 发表于 2017-5-17 11:35:18

a72736650 发表于 2017-5-17 10:15
一直用的倾注法。。先把菌液滴到皿内然后倒琼脂冲一下，还算均匀吧
反倒是涂布法，手笨涂不好

那，菌液量你们都是取多少呢？我取了1ml，可能量太大，培养基无法完全吸收，放了很久才能倒置过来培养

a72736650 · 发表于 2017-5-17 12:19:38

shanshuiqingyin 发表于 2017-5-17 11:35
那，菌液量你们都是取多少呢？我取了1ml，可能量太大，培养基无法完全吸收，放了很久才能倒置过来培养

涂布的话1ml确实太多了取0.1合适平板表面湿润一点，能涂匀

yanshuheng1112 · 发表于 2017-5-17 13:22:51

shanshuiqingyin 发表于 2017-5-17 11:35
那，菌液量你们都是取多少呢？我取了1ml，可能量太大，培养基无法完全吸收，放了很久才能倒置过来培养

涂布法是0.1ml涂布，1ml太多了

yanshuheng1112 · 发表于 2017-5-17 13:24:25

shanshuiqingyin 发表于 2017-5-17 11:35
那，菌液量你们都是取多少呢？我取了1ml，可能量太大，培养基无法完全吸收，放了很久才能倒置过来培养

而且最好是涂布之前将自己制备好的平皿多放置一段时间，不要让平皿表面太多冷凝水了，这样的话涂布不容易被培养基吸收，比较难涂布均匀

hohomomo · 发表于 2017-5-17 13:36:55

感谢各位大咖解惑啊，学习了

shanshuiqingyin · 发表于 2017-5-17 17:40:09

yanshuheng1112 发表于 2017-5-17 13:24
而且最好是涂布之前将自己制备好的平皿多放置一段时间，不要让平皿表面太多冷凝水了，这样的话涂布不容易 ...

很棒的解答，谢谢了！

shanshuiqingyin · 发表于 2017-5-17 17:42:52

a72736650 发表于 2017-5-17 12:19
涂布的话1ml确实太多了取0.1合适平板表面湿润一点，能涂匀

嗯嗯，再冒昧的问一句，如果是倾注的话，取1ml会不会多了

a72736650 · 发表于 2017-5-18 08:22:06

shanshuiqingyin 发表于 2017-5-17 17:42
嗯嗯，再冒昧的问一句，如果是倾注的话，取1ml会不会多了

1ml可以啊大概倒20ml琼脂混匀没毛病

juanx · 发表于 2017-5-18 17:41:10

shanshuiqingyin 发表于 2017-5-17 11:32
那就是可以离心之后把上清液去掉，然后取留下的沉淀咯，是这样子吗。。做过很多样品，比如颗粒剂的，(可 ...

不对。如果你要用离心法，就必须做验证，菌液要加到没离心的供试液中离心后做为试验组，菌液组不离心做对比，回收率达到要求。

shanshuiqingyin · 发表于 2017-5-24 09:47:21

a72736650 发表于 2017-5-18 08:22
1ml可以啊大概倒20ml琼脂混匀没毛病

,谢谢啦！！

shanshuiqingyin · 发表于 2017-5-24 09:50:14

juanx 发表于 2017-5-18 17:41
不对。如果你要用离心法，就必须做验证，菌液要加到没离心的供试液中离心后做为试验组，菌液组不离心做对 ...

噔，回复迟了些。谢谢友友的提点！！

zpz432927 · 发表于 2019-2-18 13:10:09

涂布时需不需要考虑涂布棒上沾的菌液量？涂布棒上会沾上不少的菌液哟

小金库 · 发表于 2022-7-21 19:09:42

谢谢分享

[检验及监测] 在做菌种梯度稀释时，是涂布法好还是倾注法好？