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[检验及监测] 在做菌种梯度稀释时,是涂布法好还是倾注法好?

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发表于 2017-5-17 10:04:04 | 显示全部楼层 |阅读模式

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请问一下各位老师,在做菌种梯度稀释进行培养时:1.是用涂布法好点还是用倾注法好点?用倾注法的话在摇匀过程中很容易把样品摇到一起,聚集在平板的中间,导致菌落无法均匀分布。2.梯度稀释需要进行离心去上清液吗?还是直接充分混匀就可以进行下一步操作?
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药徒
发表于 2017-5-17 10:15:22 | 显示全部楼层
一直用的倾注法。。先把菌液滴到皿内 然后倒琼脂冲一下,还算均匀吧
反倒是涂布法,手笨涂不好
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药徒
发表于 2017-5-17 11:05:20 | 显示全部楼层
计数最好与你实验一致。实验是涂布就涂布计数,实验是倾注就倾注法计数,误差小。特别是枯草,有过惨痛经历。涂布没什么难的,平板的冷淋水不要太多
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药徒
发表于 2017-5-17 11:15:49 | 显示全部楼层
梯度稀释时不能离心取上清液。混匀过程多摇一会,不会很分散,但也不会都聚在一块
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 楼主| 发表于 2017-5-17 11:26:18 | 显示全部楼层
juanx 发表于 2017-5-17 11:05
计数最好与你实验一致。实验是涂布就涂布计数,实验是倾注就倾注法计数,误差小。特别是枯草,有过惨痛经历 ...

嗯嗯,很有用的建议呢,谢谢了!
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 楼主| 发表于 2017-5-17 11:32:10 | 显示全部楼层
juanx 发表于 2017-5-17 11:15
梯度稀释时不能离心取上清液。混匀过程多摇一会,不会很分散,但也不会都聚在一块

那就是可以离心之后把上清液去掉,然后取留下的沉淀咯,是这样子吗。。做过很多样品,比如颗粒剂的,(可能本人技术还不够好)在混匀过程中总是很容易就混到一起
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 楼主| 发表于 2017-5-17 11:35:18 | 显示全部楼层
a72736650 发表于 2017-5-17 10:15
一直用的倾注法。。先把菌液滴到皿内 然后倒琼脂冲一下,还算均匀吧
反倒是涂布法,手笨涂不好

那,菌液量你们都是取多少呢?我取了1ml,可能量太大,培养基无法完全吸收,放了很久才能倒置过来培养
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药徒
发表于 2017-5-17 12:19:38 | 显示全部楼层
shanshuiqingyin 发表于 2017-5-17 11:35
那,菌液量你们都是取多少呢?我取了1ml,可能量太大,培养基无法完全吸收,放了很久才能倒置过来培养

涂布的话1ml确实太多了  取0.1合适  平板表面湿润一点,能涂匀
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药徒
发表于 2017-5-17 13:22:51 | 显示全部楼层
shanshuiqingyin 发表于 2017-5-17 11:35
那,菌液量你们都是取多少呢?我取了1ml,可能量太大,培养基无法完全吸收,放了很久才能倒置过来培养

涂布法是0.1ml涂布,1ml太多了
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药徒
发表于 2017-5-17 13:24:25 | 显示全部楼层
shanshuiqingyin 发表于 2017-5-17 11:35
那,菌液量你们都是取多少呢?我取了1ml,可能量太大,培养基无法完全吸收,放了很久才能倒置过来培养

而且最好是涂布之前将自己制备好的平皿多放置一段时间,不要让平皿表面太多冷凝水了,这样的话涂布不容易被培养基吸收,比较难涂布均匀
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药徒
发表于 2017-5-17 13:36:55 | 显示全部楼层
感谢各位大咖解惑啊,学习了
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 楼主| 发表于 2017-5-17 17:40:09 | 显示全部楼层
yanshuheng1112 发表于 2017-5-17 13:24
而且最好是涂布之前将自己制备好的平皿多放置一段时间,不要让平皿表面太多冷凝水了,这样的话涂布不容易 ...

很棒的解答,谢谢了!
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 楼主| 发表于 2017-5-17 17:42:52 | 显示全部楼层
a72736650 发表于 2017-5-17 12:19
涂布的话1ml确实太多了  取0.1合适  平板表面湿润一点,能涂匀

嗯嗯,再冒昧的问一句,如果是倾注的话,取1ml会不会多了
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药徒
发表于 2017-5-18 08:22:06 | 显示全部楼层
shanshuiqingyin 发表于 2017-5-17 17:42
嗯嗯,再冒昧的问一句,如果是倾注的话,取1ml会不会多了

1ml可以啊  大概倒20ml琼脂混匀  没毛病
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药徒
发表于 2017-5-18 17:41:10 | 显示全部楼层
shanshuiqingyin 发表于 2017-5-17 11:32
那就是可以离心之后把上清液去掉,然后取留下的沉淀咯,是这样子吗。。做过很多样品,比如颗粒剂的,(可 ...

不对。如果你要用离心法,就必须做验证,菌液要加到没离心的供试液中离心后做为试验组,菌液组不离心做对比,回收率达到要求。
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 楼主| 发表于 2017-5-24 09:47:21 | 显示全部楼层
a72736650 发表于 2017-5-18 08:22
1ml可以啊  大概倒20ml琼脂混匀  没毛病

,谢谢啦!!
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 楼主| 发表于 2017-5-24 09:50:14 | 显示全部楼层
juanx 发表于 2017-5-18 17:41
不对。如果你要用离心法,就必须做验证,菌液要加到没离心的供试液中离心后做为试验组,菌液组不离心做对 ...

噔,回复迟了些。谢谢友友的提点!!
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药徒
发表于 2019-2-18 13:10:09 | 显示全部楼层
涂布时需不需要考虑涂布棒上沾的菌液量?涂布棒上会沾上不少的菌液哟
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药神
发表于 2022-7-21 19:09:42 | 显示全部楼层
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