深层过滤

mengqj15 · 发表于 2015-1-22 13:43:41

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新人提问想问下细胞培养结束后进行深层过滤的生产操作洁净级别，可不可以在D级，敞口操作的话，谢谢

木子寒泪 · 发表于 2015-6-22 15:02:41

jackieustc 发表于 2015-6-22 10:55
现在没有离心设备，采用的是两级深层过滤。现在处于小的研发阶段，正在考虑购买连续流离心。

由于刚做 ...

“研发阶段很多是两级深层过滤的”
是因为它的量小，放大之后你会发现，如果不离心，直接细胞液过深层过滤膜包，会堵的很惨。

yongyong208 · 发表于 2015-11-6 09:04:56

jackieustc 发表于 2015-7-29 09:57
最近了解到其他公司工艺布局，深层过滤后添加某种物质后再进行深层过滤澄清，请问一般添加什么东东，目的是 ...

并不是深层过滤后加什么东西再深层过滤。是深层过滤前加，一种比较老的技术，millipore推荐的是加絮凝剂，然后深层过滤，sartorius推荐的是加硅藻土等配方好的，类似于深层过滤滤器里面的介质，然后用特殊的膜过滤。

目的就是增加过滤通量，降低杂质。

zfl009 · 发表于 2015-1-22 13:57:22

坐等高手回复

Whats · 发表于 2015-1-22 15:07:14

什么是深层过滤？无菌产品需要除菌过滤，D级敞口除菌过滤应该可以。

paul3122 · 发表于 2015-1-22 15:58:58

这个取决于开放式操作的程度，过滤后的液体不应该敞口转运，过滤前的料液能否敞口取决于操作工时

wwcsuper · 发表于 2015-1-22 16:14:18

可以，但是之后应该加除菌过滤，保证上清不被污染

木子寒泪 · 发表于 2015-1-22 16:41:52

能，已过GMP的证明。
国家局检查的。

lynn · 发表于 2015-1-26 09:26:21

木子寒泪发表于 2015-1-22 16:41
能，已过GMP的证明。
国家局检查的。

请问下，细胞培养也是在D级吗？
从哪一步开始你们放在C级操作的啊？
谢谢！

木子寒泪 · 发表于 2015-1-26 10:45:05

lynn 发表于 2015-1-26 09:26
请问下，细胞培养也是在D级吗？
从哪一步开始你们放在C级操作的啊？
谢谢！

细胞收获罐，之后纯化操作在C级。

neptune1120 · 发表于 2015-1-26 18:04:59

D级操作没问题，但不能敞口吧，污染后，内毒素就无法控制了！

Jason_110 · 发表于 2015-2-5 21:48:12

要看工艺，如果DF之后马上进行纯化的话，应该没问题，但是一般不太建议这么操作！
一般是一（初）级过滤二级过滤除菌过滤，深层过滤在D级完全没问题

Jason_110 · 发表于 2015-2-5 21:49:48

neptune1120 发表于 2015-1-26 18:04
D级操作没问题，但不能敞口吧，污染后，内毒素就无法控制了！

深层过滤之后大部分都会紧接着纯化，而且纯化会除掉内毒素，所以还好

jackieustc · 发表于 2015-6-21 15:08:36

Jason_110 发表于 2015-2-5 21:49
深层过滤之后大部分都会紧接着纯化，而且纯化会除掉内毒素，所以还好

能稍微详细介绍下这个单元操作吗？细胞培养结束细胞液-深层过滤两级-收获液-上柱前过滤-收获过滤液-上层析柱，培养D区与C纯化从哪个地方划分？

jackieustc · 发表于 2015-6-21 19:00:48

木子寒泪发表于 2015-1-26 10:45
细胞收获罐，之后纯化操作在C级。

培养结束后从D级通过管道打入C级的细胞罐，开始深层过滤，过滤液再除菌过滤后上柱，是这样的吗，活细胞最后如何处理，灭活吗？

木子寒泪 · 发表于 2015-6-22 10:32:51

jackieustc 发表于 2015-6-21 19:00
培养结束后从D级通过管道打入C级的细胞罐，开始深层过滤，过滤液再除菌过滤后上柱，是这样的吗，活细胞最 ...

细胞表达完之后，有一步离心，固液分离，活细胞和死细胞一并碱灭活后，排掉。

木子寒泪 · 发表于 2015-6-22 10:36:12

jackieustc 发表于 2015-6-21 15:08
能稍微详细介绍下这个单元操作吗？细胞培养结束细胞液-深层过滤两级-收获液-上柱前过滤-收获过滤液-上层析 ...

你为何不先离心，再深层过滤。第一容易堵；第二，深层过滤膜包成本高

木子寒泪 · 发表于 2015-6-22 10:38:46

jackieustc 发表于 2015-6-21 15:08
能稍微详细介绍下这个单元操作吗？细胞培养结束细胞液-深层过滤两级-收获液-上柱前过滤-收获过滤液-上层析 ...

“细胞培养结束细胞液-深层过滤两级-收获液-上柱前过滤-收获过滤液-上层析柱，”
你自己觉得，这样的下游工艺合理吗？名词都叫错了，“上柱前过滤-收获过滤液-”不明白是什么？

jackieustc · 发表于 2015-6-22 10:55:05

本帖最后由 jackieustc 于 2015-6-22 11:24 编辑

木子寒泪发表于 2015-6-22 10:36
你为何不先离心，再深层过滤。第一容易堵；第二，深层过滤膜包成本高

现在没有离心设备，采用的是两级深层过滤。现在处于小的研发阶段，正在考虑购买连续流离心。

由于刚做，不是特别专业啊，两级过滤后的上清会在下一步上柱前进行0.22um膜过滤，以防堵柱子。

今天一看昨天发的内容，确实名词不当啊，但应该能理解我想表达的，不当之处，还请木子指教。

主要就是想搞清楚上游和下游具体划分和衔接的地方一般是怎么规划区域和房间的。

另外我也了解了一下，研发阶段很多是两级深层过滤的，生产上其实家数还不多，但知道大规模生产肯定应该采用碟片式离心+ 一级深层过滤的。

木子寒泪 · 发表于 2015-6-22 14:59:37

jackieustc 发表于 2015-6-22 10:55
现在没有离心设备，采用的是两级深层过滤。现在处于小的研发阶段，正在考虑购买连续流离心。

由于刚做 ...

哇，严重了，我惭愧啊。
“主要就是想搞清楚上游和下游具体划分和衔接的地方一般是怎么规划区域和房间的。”
这个问题：细胞表达结束后，进入收获间（离心+深层过滤 D级），收获结束放罐到下游（纯化、C级），层析上样前最好加个过滤器，保护柱子（填料太贵了）。D级到C级可以直接用管路，这样方便。
其实，小试和放大生产之间，深层过滤和柱子的区别很大，买离心机是正确的选择，深层过滤膜太贵了，消耗也大。

jackieustc · 发表于 2015-6-22 15:51:33

@木子寒泪：非常感谢您耐心详细的解答，收益匪浅。

之前做微生物项目就在小试、中试和放大生产上吃了很多亏，一个老海归就知道出东西，别的都不重视，后来发现中试放大和生产在厂房布局上、模块操作、仪器选择上考虑不到，悲剧就会很大，现在准备在做研发的时候就要多关注车间设计这一块的内容。还要大家推荐这方面的书籍或文献，谢谢！

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