求助延胡索乙素不出峰

钛空城

求助：做了三天了，用了不同的柱子，不同的高效液相，但都是同一个结果：对照只有个溶剂峰，没有延胡索乙素的峰；供试品有一个小的疑似延胡索乙素的峰。对照品也开了二支新的了。各位是不是也遇到过同样的情况？？是怎么回事？

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％磷酸溶液(三乙胺调pH值至6.0)(55：45)为流动相；检测波长为280nm。理论板数按延胡索乙素峰计算应不低于3000。

对照品溶液的制备  取延胡索乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含46μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入浓氨试液-甲醇(1：20)混合溶液50ml，称定重量，冷浸1小时后加热回流1小时，放冷，再称定重量，用浓氨试液-甲醇(1：20)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

hongwei2000

做个小调查
先看一下流动相配制有没有问题
包括磷酸溶液是V/V还是W/V
与甲醇的比例有没有弄反
有没有漏液
波长有没有调错
对照品溶液有没有配错
用一个贮备液进样看看怎样
必要的话可以试一下高比例甲醇的流动相看看

钛空城

hongwei2000 发表于 2014-9-13 16:43
做个小调查
先看一下流动相配制有没有问题
包括磷酸溶液是V/V还是W/V

流动相都配了五六瓶了；应该没问题，不过调PH值就用试纸粗调的，没有用PH计调。磷酸溶液是V/V；比例没有弄反；管路无漏液现象，压力正常；波长没有调错；贮备液进样也只有溶剂峰。我现在正准备换流动相比例。

hongwei2000

钛空城 发表于 2014-9-13 16:50
流动相都配了五六瓶了；应该没问题，不过调PH值就用试纸粗调的，没有用PH计调。磷酸溶液是V/V；比例没有弄 ...

头次听说流动相pH用试纸调
一般要求流动相的pH值在正负0.1个单位之内
严格的是0.05个单位
你用pH试纸可能差1-2个单位
要是对pH敏感的样品可能保留时间差几倍都不止
你用pH计调一个看看
再把两种方法配制的流动相
包括每次配制的都测一下pH值
看看差得会有多大！

钛空城

hongwei2000 发表于 2014-9-13 16:55
头次听说流动相pH用试纸调
一般要求流动相的pH值在正负0.1个单位之内
严格的是0.05个单位

嗯，为了偷懒，就用PH试纸做了，呵呵；

hongwei2000

钛空城 发表于 2014-9-13 16:57
嗯，为了偷懒，就用PH试纸做了，呵呵；

偷得几分钟的懒
花了好几天去找原因
实验是严谨的
要是你们老板知道了
不知道要怎么罚你们了

钛空城

hongwei2000 发表于 2014-9-13 17:01
偷得几分钟的懒
花了好几天去找原因
实验是严谨的

{:soso_e133:}

yjjjuichin

有没有可能液相色谱仪波长偏移，能量不够，280能量需要很足！还有可能没有分离开，与溶剂峰一起了

钛空城

yjjjuichin 发表于 2014-9-13 17:18
有没有可能液相色谱仪波长偏移，能量不够，280能量需要很足！还有可能没有分离开，与溶剂峰一起了

没有做过波长偏移，有可能是能量不足，明天换个新氘灯再试下；原来也有做过，差不多要30分钟才出峰，现在只有在2分多钟才有峰，初步估计应该是溶剂峰。

joan1008

这个品种我在很多年以前做过，记忆中很好做，从来没遇到过你这种情况，你好好找找原因。。。

可亲可爱

钛空城 发表于 2014-9-13 17:23
没有做过波长偏移，有可能是能量不足，明天换个新氘灯再试下；原来也有做过，差不多要30分钟才出峰，现在 ...

你不是已用了不同的液相做了吗？怎么可能台台液相的灯的能量都不足的，仪器一般对能量有监控，280nm也不是短波长的。不可能是波长原因，再说吸收峰不可能是选择在尖锐的峰尖上的，难怕是波长不准，在边上也应当有吸收。而不会绝无峰的情况。流动相的PH值，对被检测成分的存在的形式影响十分重要。存在的形式不同出峰时间和吸收波可能都会不一样的。这个PH值一定要准确。

幻影

来学习了。

道路漫长黑暗

学习，大部分能遇到的问题调查到最后都会发现都是些低级错误，正是由于太低级了以至于大部分人都不考虑这个问题。

钛空城

昨天终于做出来了，确实是PH没调到位引起的。{:soso_e133:}

华123

钛空城 发表于 2014-9-16 09:05
昨天终于做出来了，确实是PH没调到位引起的。

我们也碰到这个问题，已经确定流动相的PH没问题（用两个PH计测过流动相PH都在6.0），但是也只出溶剂峰

华123

hongwei2000 发表于 2014-9-13 16:55
头次听说流动相pH用试纸调
一般要求流动相的pH值在正负0.1个单位之内
严格的是0.05个单位

我们也碰到这个问题，已经确定流动相的PH没问题（用两个PH计测过流动相PH都在6.0），但是也只出溶剂峰（3.4分钟开始出峰）
我们是新买的安捷伦1260II液相，VWD检测器，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1％磷酸溶液(三乙胺调pH值至6.0)(55：45)为流动相；检测波长为280nm。流速1ml/分钟。

wushaojie

华123 发表于 2020-4-11 21:44
我们也碰到这个问题，已经确定流动相的PH没问题（用两个PH计测过流动相PH都在6.0），但是也只出溶剂峰

现在你们的峰做出来了？问题处在哪里？

wushaojie

我做的供试品延胡索乙素峰值不出来的原因是什么，一大堆杂峰堆在一起？请求大神

QQ3737

我想问一下这个PH是混合流动相后调比例，还是只调0.1％磷酸溶液的PH呢？

熊啊

我现在也是遇到对照品不出峰的情况  只出了溶剂峰 调pH只是拿试纸调的  现在一直走不出峰不知道哪里出了问题  我也只是一个刚上手三四个月的小白 求大神指教