2015版药典微生物限度检查方法验证（方法适用性试验）

whictgao

2015版药典中微生物限度检查方法验证要求：
1.试验组 取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每1ml供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。
2.若因供试品抗菌活性或溶解性较差的原因导致无法选择最低稀释级的供试液进行方法适用性试验时，应采用适宜的方法对供试液进行进一步的处理。如果供试品对微生物生长的抑制作用仍无法以其他方法消除，供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理后再加入试验菌悬液进行方法适应性试验。
在对胶囊和片剂进行试验中发现：
以前进行验证时供试品1：10稀释后加到平皿中，菌液也加到平皿中。菌液与供试液是分开的。回收率有80%左右。平皿法就可以做出来了。
按2015进行时将菌液加至1：10供试液进行试验时，回收率都很低，特别是枯草芽孢杆菌。基本上回收不到（平皿上一般只长5个菌左右）。查了一下产品成份里面只有尼泊金酯有抑菌作用。

大家有没有遇到相似的情况，有什么好的解决办法吗？

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whictgao 发表于 2014-3-5 13:32
就是因为枯草不易分散，所以加枯草后的样品溶液漩涡混合的时间是最长的。菌落计数也是稀释液加菌混合后计 ...

试试无菌棉签，在管壁上摩擦，效果挺好的

彩虹

7.9  具抑菌活性的供试品
当供试品具有抑菌活性时，应消除供试液的抑菌活性后，再依法检查。常用的方法如下：
7.9.1  稀释法  取规定量的供试液，加至较大量的培养基中，使单位体积内的供试品含量减少至不具抑菌作用。用平板法测定菌数时，1ml供试液可等量分注多个平皿；控制菌检查时，可加大增菌培养基的用量。培养基稀释法适用于抑菌作用不强的制剂。
7.9.2  离心沉淀法  此方法用于去除供试液中的沉淀物，对于抑菌活性较强的供试品，如供试液中有不溶颗粒、沉淀，取供试液，先以500 r／min，离心3min，取上清液进行试验，此方法用于细菌计数和控制菌（细菌）检查。
7.9.3  薄膜过滤法  见细菌、霉菌和酵母菌计数。
7.9.4  中和法  凡含汞、砷或防腐剂的供试品，可用相应的试剂钝化、中和其抑菌活性，制成供试液。

syhorchid

路过

唐延进

学习学习   

bernie

学习

lxiaof

枯草芽胞杆菌在菌悬液中不容易分散，10倍稀释时要注意吸管吹吸混匀，最好加上试管拍打手心步骤，以促进菌分散。根据你的说法，应该不需要特别步骤能做出，把菌种稀释做好就行

hljhy

学习学习

燕长风2013

楼主，你好！很高兴看到你的帖子。关于2015药典微生物检验方法的验证，我也存在很多疑惑。依你的描述，已经开展了验证工作。我们也有胶囊剂和片剂等品种，据我了解，胶囊剂的囊壳溶解后呈胶状，菌液是很难分散的，在以前的工作中，尝试过囊壳先分离，在不同的容器中溶解，分别试验，工作量大，不知道对楼主有没有用。楼主有没有参加过省级药检所的培训，在这方面有没有更好的建议？

whictgao

lxiaof 发表于 2014-3-3 09:32
枯草芽胞杆菌在菌悬液中不容易分散，10倍稀释时要注意吸管吹吸混匀，最好加上试管拍打手心步骤，以促进菌分 ...

就是因为枯草不易分散，所以加枯草后的样品溶液漩涡混合的时间是最长的。菌落计数也是稀释液加菌混合后计数的。

lxiaof

whictgao 发表于 2014-3-5 13:32
就是因为枯草不易分散，所以加枯草后的样品溶液漩涡混合的时间是最长的。菌落计数也是稀释液加菌混合后计 ...

感觉用漩涡混合不如用吸管吹吸加拍打。漩涡混合速度快，溶液流向一致，倒不容易分散粘性大的枯草芽胞杆菌。

善变的云

不错不错，你们已经先行一步了。学习学习。

llscool

刚开始学微生物的路过···

shixh

学习，学习

≈漂ゅ箛嬿

薄膜过滤法  见细菌、霉菌和酵母菌计数。

whictgao

≈漂ゅ箛嬿 发表于 2014-4-12 14:44
薄膜过滤法  见细菌、霉菌和酵母菌计数。

片剂的白念与黑曲霉，怎么过滤，全是颗粒，膜都堵上了？

wuzhongfu168

关于2015药典微生物检验方法的验证，我也存在很多疑惑，等药典出来了会有相关解释吧

whictgao

对于原辅料，以前按2010版做过微生物方法适用性检查的，现在是否按2015版再重新做3次呢？

yyylggglll

学习

HEBE

学习
                       

無掵

whictgao 发表于 2014-4-12 20:20
片剂的白念与黑曲霉，怎么过滤，全是颗粒，膜都堵上了？

多种方法相结合吧，可以先低速离心或自然沉降，然后去上清进行检测。