调整HPLC流动相比例致色谱图中的出峰顺序发生变化是否可行？

zaa2007

    我们有一个产品（标准修订件刚发布）的有关物质检查，系统适应性要求：调整流动相比例，使系统适应性溶液色谱图主峰的保留时间约为8分钟，主峰和杂质I峰之间的分离度应大于5.0。
    标准中流动相的比例是85:15，按此比例主峰和杂质I峰之间的分离度不达标，色谱图中杂质I峰在主峰后；直至调整流动相的比例是90:10时，主峰和杂质I峰之间的分离度大于5.0，但色谱图中杂质I峰在主峰前。
    流动相比例的调整致杂质I的保留时间发生了变化，色谱图中的出峰顺序发生了改变，请问各位大侠这种变化是否可以接受？

平静如水1

潇潇素雨

换个色谱柱重新试一下，先别动流动相比例

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zaa2007

    我们和质量标准起草者联系了：杂质I峰应该在主峰前，我们的流动相比例调整过大，超过了药典规定范围，后续再进行试验。
    谢谢各位大侠的解答！

dengjianyyy

zaa2007 发表于 2020-5-14 10:32
对该检验方法我们做了很多工作，使用了3个供应商的柱子，通过调整流速、流动相比例最后才做到现在这个结果 ...

看药典啊，占比小于33%，±30%，大于33%，±10%。

zaa2007

对该检验方法我们做了很多工作，使用了3个供应商的柱子，通过调整流速、流动相比例最后才做到现在这个结果。请问中国药典规定的HPLC流动相比例调整范围是多少？

dengjianyyy

超过耐用性范围意味着分析方法发生变更，需要按分析方法开发的程序来进行研究。

志在超越

严格来说，你的流动相调整比例已经超出可接受范围。

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915_雨

学下薄层跑板的基础理论，搞清楚为啥先出后出，就明白了。

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z_lingtian

首先应该不是考虑改变流动相比例吧，色谱柱的问题考虑过吗？新旧色谱柱对分离度的影响有时候很大的；还有流速调节过吗？对分离度也会有影响的。

真的改变流动性配比引起出峰顺序改变需要重新做验证吧，因为检测限、定量限之类的肯定都不一样了。

dfzsli

不可接受，顺序不能改变，改变意味方法变了，需验证。